BCA(bicinchonininc acid)與二價(jià)銅離 子的硫酸銅等其他試劑組成的試劑,混合一起即成為蘋(píng)果綠,即BCA工作試劑。在堿性條件下,BCA與蛋白質(zhì)結(jié)合時(shí),蛋白質(zhì)將Cu2+還原為Cu+,一個(gè) Cu+螯合二個(gè)BCA分子,工作試劑由原來(lái)的蘋(píng)果綠形成紫色復(fù)合物,最大光吸收強(qiáng)度與蛋白質(zhì)濃度成正比。
1、 操作簡(jiǎn)單,快速,45分鐘內(nèi)完成測(cè)定,比經(jīng)典的Lowary法快4倍且更加方便;
2、 準(zhǔn)確靈敏:試劑穩(wěn)定性好,BCA試劑的蛋白質(zhì)測(cè)定范圍是20-2000μg/ml。
3、 經(jīng)濟(jì)實(shí)用,除試管外,測(cè)定可用微板法操作,大大節(jié)約樣品取樣量;
4、 抗試劑干擾能力比較強(qiáng),如去垢劑,尿素等均無(wú)影響
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測(cè)定波長(zhǎng)為562nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃)
3、漩渦混勻器
4、微量移液器