注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
AsA又稱維生素c。AsA是輔酶、自由基清除劑、電子共體/受體和草酸鹽與酒石酸鹽生物合成的底物等。作為植物細(xì)胞中最重要的抗氧化劑，AsA在保護(hù)葉綠體免于氧化損傷起著舉足輕重的作用，也是衡量農(nóng)作物產(chǎn)品品質(zhì)的重要指標(biāo)之一。
測(cè)定原理：
在乙酸溶液中，抗壞血酸與固藍(lán)鹽B反應(yīng)生成黃色的草酰肼–2–羥基丁酰內(nèi)酯衍生物，在最大吸收波長420處測(cè)定吸光度。
自備儀器和用品：
研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體4mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體6mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×2瓶（棕色），4℃避光保存。臨用前配制，每瓶加入7 mL蒸餾水充分溶解，用不完的試劑4℃下可保存3天。
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；8000g，4℃離心20min，取上清液置冰上混勻待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
AsA測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到420 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 在EP管中加入下列試劑
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試劑名稱 | 測(cè)定管 | 空白管 |
| 樣本 | 200 |
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| 提取液 |
| 200 |
| 試劑一 | 60 | 60 |
| 試劑二 | 100 | 100 |
| 試劑三 | 240 | 240 |
| 水 | 1400 | 1400 |
混勻，25℃靜置20min，吸取1mL加入1mL玻璃比色皿中，420nm下測(cè)定各管吸光值。ΔA=A測(cè)定-A空
注意：空白管只需測(cè)定一次。
