機(jī)體通過(guò)酶系統(tǒng)與非酶系統(tǒng)產(chǎn)生氧自由基,后者能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸,引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化作用,并因此形成脂質(zhì)過(guò)氧化物。如:醛基(丙二醛MDA)、酮基、羥基、羰基、氫過(guò)氧基或內(nèi)過(guò)氧基,以及新的氧自由基等。脂質(zhì)過(guò)氧化作用不僅把活性氧轉(zhuǎn)化成活性化學(xué)劑,即非自由基性的脂類分解產(chǎn)物,而且通過(guò)鏈?zhǔn)交蜴準(zhǔn)街ф湻磻?yīng),放大活性氧的作用。因此,初始的一個(gè)活性氧能導(dǎo)致很多脂類分解產(chǎn)物的形成,這些分解產(chǎn)物中,一些是無(wú)害的,另一些則能引起細(xì)胞代謝及功能障礙,甚至死亡。氧自由基不但通過(guò)生物膜中多不飽和脂肪酸的過(guò)氧化引起細(xì)胞損傷,而且還能通過(guò)脂氫過(guò)氧化物的分解產(chǎn)物引起細(xì)胞損傷。因而測(cè)試 MDA的量常?煞从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的程度,間接地反映出細(xì)胞損傷的程度。MDA的測(cè)定常常與SOD的測(cè)定相互配合,SOD活力的高低間接反應(yīng)了機(jī)體清除氧自由基的能力,而MDA的高低又間接反應(yīng)了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度,通過(guò)SOD與MDA的結(jié)果分析有助于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、藥理及工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、操作簡(jiǎn)便:可將試劑混合成單試劑操作,全程約50分鐘,可測(cè)48例左右樣本。
2、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放12個(gè)月有效,試劑配制后至少能存放6個(gè)月;呈色穩(wěn)定,顯色后24小時(shí)吸光度不變。
3、再現(xiàn)性好:批內(nèi)CV=2.3%,批間CV=5.34%。
4、回收試驗(yàn): X =101.8%。
5、受外界影響因素。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
6、適用于細(xì)胞樣本。
所需儀器及自備試劑:
1、酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測(cè)定波長(zhǎng)為532nm)
2、恒溫水浴箱(孵育溫度為95℃以上)
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌: 常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書(shū)。
操作流程:
1、按步驟加入樣本和試劑
2、漩渦混勻,95℃以上沸水浴40分鐘,流水冷卻,然后3500~4000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,取上清待測(cè)
3、532nm波長(zhǎng),1cm光徑,比色測(cè)定各管吸光度值
注:取樣量一般為0.1~0.2ml(樣本量夠直接取0.2ml測(cè)定)