需儀器及自備試劑：
1、分光光度計（比色測定波長為530nm）
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 （孵育溫度為37℃）
3、漩渦混勻器
4、微量移液器
樣本收集與前處理:
血清（漿）可直接測定。
動物組織樣本：可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液，離心取上清測定。
培養(yǎng)細胞、細菌、植物組織：常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測定。
具體的樣本前處理：參考我們隨貨發(fā)送的《實驗方法學》以及試劑盒中詳細說明書。
操作流程:
1、按說明操作加入樣本、R1、R2、R3，37ºC反應15分鐘
2、按說明操作加入R4、R5，混勻
3、530nm波長1cm光徑，比色
一、測定原理:
NOS催化L-Arg和分子氧反應生成NO,NO與親核性物質(zhì)生成有色化合物，在.530nm波長下測定吸光度，根據(jù)吸光度的大小可計算出NOS活力。
二、試劑組成與配制:(50管/48樣)
試劑一:底物緩沖液6mlx2瓶，-20C 以下避光冷凍保存3個月。臨用前化凍搖勻。沒有用完的試劑，可以-20°C以下避光冷凍保存以備下次再用。
試劑二:促進劑淡黃色或白色粉劑x3支，稀釋液0.6 mlx3支。-20C 以下冷凍保存6個月。測試前取稀釋液一支0.6ml 加入一支粉劑中充分混勻
（即將1.5ml離心管反復顛倒，并將小離心管尖部的液體彈下來)，測試后剩余的試劑可放入-20C以下冷凍保存，時間不超過一周。若發(fā)現(xiàn)粉劑變成黃褐色或咖啡色，則不可以再用。
試劑三:黃色顯色劑6ml×1瓶，4℃避光冷藏保存3個月。
試劑四:透明劑6ml×1瓶，室溫保存6個月。天冷后會凝固，37℃水浴變澄清時再使用。試劑五。終止劑60mlx2瓶，4C保存6個月。室溫低會出現(xiàn)渾濁，37℃水浴至透明再用。
三、注意
1、促進劑最好現(xiàn)用現(xiàn)配，配好后盡量一日內(nèi)用完，如有剩余則-20℃以下保存不超過一周;未配制之前的2號促進劑和稀釋液均應-20C以下保存，如淡黃色或白色粉末變成咖啡色或黃褐色顆粒則失效不可用。
2、NOS活性低，穩(wěn)定性差，樣品或勻漿上清如不馬上檢測，應置-20℃ 以下冷凍保存。3、試劑一與配制好的試劑二應避免反復凍融。
4、室溫低時，NOS 5號會出現(xiàn)渾濁，如果已經(jīng)在測試管中加入了NOS 5號，可將測試管對著燈光，觀察有無結(jié)晶或渾濁。如果有結(jié)晶或渾濁，請將每只測試管37C水浴鍋中晃動5分鐘，再比色。
