一、測定原理
乙酰膽堿與底物液反應(yīng),通過顯色反應(yīng)生成棕色化合物,測定其吸光度OD值,其顏色深淺與乙酰膽堿濃度成正比。
二、需自備試劑和儀器
酶標(biāo)儀(550nm)、微量移液器、漩渦混勻器、低速離心機(jī)、37℃水浴/氣浴箱。
三、試劑組成及配制:(48T)
試劑一:工作液:甲粉×1支,甲粉溶劑3.5ml×1瓶;乙液3.5mlX1瓶,
4℃保存3個(gè)月。
試劑一工作液配制:臨用前將一支甲粉加入到一瓶甲粉溶劑中配成甲液,
按甲液:乙液=1:1混勻后使用,按需要量配制。
試劑二:終止劑,6ml×1瓶,4℃保存3個(gè)月。
試劑三:顯色劑,6ml×1瓶,4℃避光冷藏保存3個(gè)月。
試劑四:澄清劑,10ml×1瓶,低溫會凝固,用前37℃水浴5分鐘以上溶解完全,澄清透亮后使用。
試劑五:Ach標(biāo)準(zhǔn)品粉劑×3支,標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液10ml×1瓶。
10mg/ml標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液配制:臨用前用移液器取0.25ml標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液加入到一支標(biāo)準(zhǔn)品粉劑中,混勻溶解完全制備標(biāo)準(zhǔn)曲線備用。
1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液配制:取10mg/ml標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液100μL加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋900 μL,即為 1mg/ml標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液,4℃保存不超過3天。