ATP酶存在于細(xì)胞膜及細(xì)胞器膜上,在物質(zhì)運(yùn)送、能量轉(zhuǎn)換以及信息傳遞方面具有重要的作用,機(jī)體在缺O(jiān)2及一些疾病狀態(tài)下,此酶活力發(fā)生一系列改變。另外有些遺傳疾病也與此酶活力的高低有關(guān)。
ATP酶可分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷,測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量可判斷ATP酶活力的高低。Cu2+-ATPase酶是一種能被鉀激活而可被釩酸抑制的酶。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取樣本量100l。
3、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
4、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
5、回收試驗(yàn): X =96%。
6、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
7、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物組織、紅細(xì)胞以及各種培養(yǎng)細(xì)胞、各種水產(chǎn)等,效果均佳。
所需儀器及自備試劑:
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀/半自動(dòng)生化分析儀(比色測(cè)定波長(zhǎng)為660nm)
2、恒溫水浴箱或氣浴箱 (孵育溫度為37℃和45℃)
3、臺(tái)式離心機(jī)
4、漩渦混勻器
5、微量移液器
樣本收集與前處理:
紅細(xì)胞:需按照試劑盒中說(shuō)明書上紅細(xì)胞的測(cè)定方法進(jìn)行提取后測(cè)定。
動(dòng)物組織樣本:可用生理鹽水按重量體積比制備成組織勻漿液,離心取上清測(cè)定。
培養(yǎng)細(xì)胞:常用PBS作為勻漿介質(zhì)破碎后離心取上清測(cè)定。
具體的樣本前處理:參考我們隨貨發(fā)送的《實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》以及試劑盒中詳細(xì)說(shuō)明書。
操作流程:
1、酶促反應(yīng):按說(shuō)明操作加入樣本100l和混合試劑,37℃準(zhǔn)確反應(yīng)10分鐘
2、加R7,3500轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘,取上清
3、定磷:取上清液加入定磷劑,45℃水浴5分鐘
4、660nm波長(zhǎng),1cm光徑,比色