- 介紹: 基 因 型F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15Δ lacX74 recA1 araΔ139Δ(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG簡(jiǎn) 要 說(shuō) 明TOP10菌株來(lái)源于MC1061菌株, 是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的感受態(tài)細(xì)胞之一,基因型與DH10B高度類(lèi)似(DH10B為galE15型,而TOP10為galU型)。TOP10生長(zhǎng)速度快(比DH5α快,但比Mach1-T1生長(zhǎng)速度慢),10小時(shí)可見(jiàn)克隆, recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取?捎糜跇(gòu)建克隆,藍(lán)白斑篩選等實(shí)驗(yàn),具有鏈霉素抗性。High5TM系列TOP10感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg。
- 操 作 說(shuō) 明
- 1.TOP10感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻,待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中),加入目 的DNA(質(zhì);蜻B接產(chǎn)物)并用手撥打EP管底輕輕混勻,冰上靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
- 4.5000rpm離心一分鐘收菌,留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少13h。
- 注 意 事 項(xiàng)
- 1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化,融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒,否則會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。
- 2.混入質(zhì);蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
- 3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
- 儲(chǔ)存條件: -80℃
- 用途: 克隆感受態(tài)細(xì)胞
- 注意:部分產(chǎn)品我司僅能提供部分信息,我司不保證所提供信息的權(quán)威性,僅供客戶(hù)參考交流研究之用。
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