- 介紹： 基因型F´{lacIq Tn10 (TetR)} mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1araD139∆(ara-leu)7697 galU galK rpsL endA1 nupG簡(jiǎn) 要 說(shuō) 明TOP10F`菌株來(lái)源于TOP10菌株。將F`{lacIq Tn10 (TetR)}因子轉(zhuǎn)入TOP10菌株，即為TOP10F`。該F`因子攜帶lacIq 抑制子，可抑制trc，tac，lac等啟動(dòng)子下游基因的表達(dá)，從而可以用于一些表達(dá)毒性蛋白質(zhì)粒的擴(kuò)繁。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。TOP10F’可用于構(gòu)建克隆，藍(lán)白斑篩選（如用于藍(lán)白斑篩選，需在培養(yǎng)基中加入IPTG誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶基因的表達(dá)）實(shí)驗(yàn)，具有四環(huán)素抗性。High5TM系列TOP10F`感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>108cfu/μg。
- 操 作 說(shuō) 明
- 1. TOP10F`感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物）并用手撥打EP管底輕輕混勻，冰中靜置25分鐘。
- 2.42℃水浴熱激60秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 3.向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
- 4.5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱12-16h，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性小菌落。
- 注 意 事 項(xiàng)
- 1.感受態(tài)細(xì)胞最好在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí) 間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
- 2.混入質(zhì)�；蜻B接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
- 3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少最終用于涂板的菌量。
- 儲(chǔ)存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細(xì)胞
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