- 介紹： 基 因 型K12 F- lambda- ilvG- rfb-50 rph-1
- 簡 要 說 明 ：MG1655菌株來源于W1485，是K12的衍生菌株，是一種經過較少改造，比較接近于“WT-野生型”的大腸桿菌
- 工程菌株。MG1655外觀形態(tài)標準，同時可做為擴增大腸桿菌WT型基因的模板使用，也可作為蛋白表達的宿主菌株使用，
- 但不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液盡量去除核酸酶，以防提取
- 的質粒被降解。pUC19質粒檢測轉化效率>0.5×108 cfu/μg DNA。
- 操 作 說 明
- 1. MG1655感受態(tài)細胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質�；蜻B接產物）并用手撥打EP管底
- 輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
- 2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
- 3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
- 4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
- 5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15 h。
- 注 意 事 項
- 1. 感受態(tài)細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
- 2. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。
- 儲存條件： -80℃
- 用途： 克隆感受態(tài)細胞
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