腺苷脫氨酶（ADA）測試盒說明書
一、測定原理：
腺苷脫氨酶（Adenosine deaminase，ADA）催化腺嘌呤核苷水解，產(chǎn)生次黃嘌呤核苷和氨，然后對產(chǎn)生的氨進(jìn)行顯色，從而可以計(jì)算血清 ADA 的活性。
二、試劑組成及配制（100 管/48 樣）：
試劑一：粉劑×6 支，稀釋液 5ml×6 瓶，4℃保存，臨用前 2 小時(shí)每支粉劑用 1 瓶稀釋液溶解。
[注]:需充分混勻完全溶解，否則會(huì)影響結(jié)果。配好后4C保存48小時(shí)。
試劑二：粉劑×2 支，稀釋液 100ml×2 瓶，臨用時(shí)每支粉劑用 1 瓶稀釋液溶解即成，4℃避光
保存。
試劑三：貯備液 2ml×2 瓶，稀釋液 100ml×2 瓶。臨用時(shí)每瓶貯備液用 1 瓶稀釋液稀釋
即成，4℃避光保存，可穩(wěn)定兩個(gè)月。
試劑四：1mg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 1ml×1 瓶，4℃保存。
25µg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取 1mg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 0.25ml 用雙蒸水定容至 10ml，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。
三、操作表：
|
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 | 對照管 |
|
|
|
|
|
|
| 雙蒸水（ml） | 0.02 |
|
|
|
| 25µg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)液（ml） |
| 0.02 |
|
|
| 樣本（ml） |
|
| 0.02 | 0.02 |
| 試劑一（ml） | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
|
| 混勻，37℃準(zhǔn)確反應(yīng) 60 分鐘 |
|
| ||
|
|
|
|
|
|
| 試劑二（ml） | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 試劑一（ml） |
|
|
| 0.25 |
| 試劑三（ml） | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
混勻，37℃水浴 30 分鐘后，室溫靜置 10 分鐘，波長 640nm，1㎝光徑，雙蒸水調(diào)零，測各管吸光度值。
【注】本試劑盒可測定10%組織勻紫中的ADA. 但是顯色后需3500轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘后才能進(jìn)行比色
四、單位定義與計(jì)算公式：
（一）、血清中 ADA 酶活性的計(jì)算：
1、單位定義：1ml 血清在 37℃和底物作用 60 分鐘產(chǎn)生 1µg 氨氮為一個(gè)酶活性單位。
（二）、組織勻漿中 ADA 酶活性的計(jì)算：
1、單位定義：每毫克組織蛋白在 37℃和底物作用 60 分鐘產(chǎn)生 1µg 氨氮為一個(gè)酶活性單位。
五．測定意義
ADA廣泛分布于各組織中，以盲腸、小腸粘膜和脾中含量最高，肝中含量僅為小腸的7%~14%，肝臟中90%在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞核含量低，但卻是胞核中有關(guān)核酸代謝酶中含量最高的一個(gè)。
在肝臟疾病中，ADA 活性增高。阻塞性黃疸時(shí)此酶活性一般不升高， 而在肝實(shí)質(zhì)性損傷時(shí)，此酶和ALT同時(shí)升高，故有助于鑒別。在慢性活動(dòng)性肝炎和肝硬化時(shí)ALT陽性率較低，而ADA陽性率可達(dá)90%左右，增高較明顯。
