蛋白抽提試劑盒(Nuclear and Cytoplasmic Protein Extraction Kit)提供了一種比較簡(jiǎn)單、方便的從培養(yǎng)細(xì)胞或新鮮組織中抽提細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞漿蛋白、細(xì)胞膜蛋白與細(xì)胞骨架蛋白的方法。約90分鐘就可以完成培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞漿蛋白、細(xì)胞核蛋白、細(xì)胞膜蛋白與細(xì)胞骨架蛋白的分離。抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，報(bào)告基因檢測(cè)以及酶活力測(cè)定等后續(xù)操作。
產(chǎn)品組分：
| A | 胞漿蛋白提取液 | 60mL |
| B | 胞核蛋白提取液 | 10mL |
| C | 膜蛋白提取液 | 6mL |
| D | 結(jié)構(gòu)蛋白提取液 | 6mL |
| E | 磷酸酶抑制劑II（50×） | 1mL |
| F | PMSF（100×） | 1ml |
使用方法
實(shí)驗(yàn)流程： 1、試劑準(zhǔn)備 1.1準(zhǔn)備溶液 1.1.1室溫融解試劑盒中的各種溶液，溶解后除結(jié)構(gòu)蛋白提取液外，其他試劑立即置于冰上； 1.1.2 結(jié)構(gòu)蛋白提取液溶解后，可放置于37℃水浴中溫浴至透明后，常溫放置。 1.2蛋白提取工作液的準(zhǔn)備 1.2.1胞漿蛋白提取工作液的準(zhǔn)備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實(shí)驗(yàn)時(shí)胞漿蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。 1.2.2胞核蛋白提取工作液的準(zhǔn)備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實(shí)驗(yàn)時(shí)胞核蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。 1.2.3膜蛋白提取工作液的準(zhǔn)備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實(shí)驗(yàn)時(shí)膜蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。 1.2.4 結(jié)構(gòu)蛋白提取工作液的制備：臨用前，根據(jù)處理樣品的量估算實(shí)驗(yàn)時(shí)結(jié)構(gòu)蛋白提取液的需要量，并分別按照1:50比例加入磷酸酶抑制劑II和1:100比例加入蛋白酶抑制劑PMSF。 2、對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞樣品： 2.1胞漿蛋白提取 2.1.1加2.0ml（2.0×107細(xì)胞 ）的胞漿蛋白提取工作液，在4℃條件下震蕩20分鐘； 2.1.2準(zhǔn)備1-5ml的注射器，用注射器吹打步驟1震蕩過(guò)的溶液50-90次，在4℃條件下，15000g離心10分鐘。取上清液存于EP管中，即為胞漿蛋白； 2.2胞核蛋白的提取 取2.1.2步驟獲得的沉淀物加入4.0ml/20million cells冰浴的胞漿蛋白提取工作液，在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下15000g離心10分鐘，棄去上清液，沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰凍的胞核蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下15000g離心10分鐘，上清液為細(xì)胞核蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存； 2.3胞膜蛋白的提取 在步驟2.2中的沉淀物中加入1.0ml/20million cells冰凍的膜蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下15000g離心10分鐘，上清液為細(xì)胞膜蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存。 2.4結(jié)構(gòu)蛋白的提取 在步驟2.3的沉淀物中加入常溫或37℃水浴過(guò)的透明的結(jié)構(gòu)蛋白提取工作液 0.5ml/20million cells, 4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下15000g離心10分鐘，保存上清液即為細(xì)胞骨架蛋白； 2.5待測(cè)蛋白的保存 待檢測(cè)濃度的蛋白存于-70℃。 3.對(duì)于組織樣品： 3.1胞漿蛋白提取 3.1.1加2.0ml/g的胞漿蛋白提取工作液,在4℃條件下研磨，重復(fù)勻漿兩次，至全部溶解； 3.1.2在4℃條件下，震蕩5分鐘，18000g離心10分鐘。取上清液存于EP管中，即為胞漿蛋白，沉淀物繼續(xù)實(shí)驗(yàn)； 3.2胞核蛋白的提取 在步驟3.1.2中的沉淀物中加4.0ml/g的胞漿蛋白提取工作液,在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘，棄去上清液；沉淀物中加1.0ml/g冰凍的胞核蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘，上清液為細(xì)胞核蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存； 3.3胞膜蛋白的提取 在步驟3.2中的沉淀物中加1.0ml/g冰凍的膜蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘，上清液為細(xì)胞膜蛋白，轉(zhuǎn)入EP管并保存； 3.4結(jié)構(gòu)蛋白的提取 3.4.1在步驟3.3中的沉淀物中加入常溫或37℃水浴過(guò)的透明的結(jié)構(gòu)蛋白提取工作液0.5ml/g，震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘，保存上清液； 3.4.2在3.4.1步中的沉淀物中加1.5ml/g冰凍的胞漿蛋白提取工作液, 在4℃條件下震蕩5分鐘，4℃條件下18000g離心10分鐘,保存上清液； 2.4.3混合前兩步的上清液，此為骨架蛋白； 3.5待測(cè)蛋白的保存 待檢測(cè)濃度的蛋白存于-70℃。
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