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柑橘黃龍病菌亞洲種PCR試劑盒

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 產(chǎn)品及特點 柑橘黃龍病菌亞洲種（Candidatus Liberobacter Asiaticus）是一種類菌體，柑橘感染黃龍病后，全年均可發(fā)生，一般以夏梢和秋梢發(fā)病最多，其次是春梢。新梢的癥狀是葉片表現(xiàn)黃化和黃綠相間的斑駁。在葉片凋落后，枝梢上新長出的葉片表現(xiàn)缺素狀的花葉。病梢變短、生勢衰弱，病葉黃厚、變小，且易脫落，形成枯枝。開花不適時，花開的多、落得多。果小而畸形，或紅鼻果。后期，根部往往表現(xiàn)為小根腐爛。此菌可以侵染蕓香科柑橘屬和金橘屬植物，引發(fā)癥狀。通過菟絲子，此菌可以侵染長春花。在自然界，蕓香科蠔殼刺屬和木蘋果屬植物可能受此菌侵染，九里香屬植物常見著生大量傳播柑橘黃龍病的柑橘木虱，但其體內(nèi)未見病原菌。

本產(chǎn)品是根據(jù) PCR 原理開發(fā)的柑橘黃龍病菌亞洲種的檢測試劑盒，它具有下列特點：

1.即開即用，用戶只需要提供 DNA 模板。
2.引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴柑橘黃龍病菌亞洲種，與其他病原沒有交叉反應(yīng)。
3.提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4.PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
5.本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
規(guī)格及成分
成  份                      編號                    十孔盒包裝
PCR MagicMix 3.0    90805                 1 mL（紅蓋）
超純水                   100935              1 mL（亮黃色）
柑橘黃龍病菌亞洲種 13-5300yw       100 μL（白蓋）
PCR 引物混合液
柑橘黃龍病菌亞洲60908-5300pc 50 μL（黃蓋）
種 PCR 陽性對照
（1×10E8 拷貝/μL）
 
運輸及保存 ：低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其他試劑。
 
自備試劑   樣品 DNA。
 
使用方法
一、樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。
2.如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 柑橘黃龍病菌亞洲種 PCR 陽性對照的 10000
倍稀釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板DNA 放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）
3.對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分：

 

成分

N+2 個

PCR 陰性

PCR 陽性

 

 

樣品管

對照

對照

 

 

 

 

 

PCR Magic Mix 3.0

各 20 μL

20 μL

20 μL

 

 

 

 

 

 

 

 

柑橘黃龍病菌亞洲種

各 2 μL

2 μL

2 μL

 

 

PCR 引物混合液

 

 

 

 

 

 

 

N+2 個樣品 DNA 模板

各 18 μL

-

-

 

 

 

 

 

 

 

 

PCR 陰性對照（水）

-

18 μL

-

 

 

 

 

 

 

 

 

PCR 陽性對照（柑橘黃龍

 

 

 

 

 

病菌亞洲種 PCR 陽性對

-

-

18 μL

 

 

照的 10000 倍稀釋液）

 

 

 

 

 

 

 

 

4.  按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

過程

溫度

時間

 

 

 

 

 

預(yù)變性

95℃

5 min

 

 

 

 

 

PCR 反應(yīng)

95℃

30 sec

 

 

 

 

55℃

30 sec

 

（35 個循環(huán)）

 

 

 

 

72℃

30 sec

 

 

 

 

 

 

 

最后延伸

72℃

7 min

 

 

 

 

 
三、電泳檢測

3.取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。2%瓊脂糖凝膠電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。陽性對照必須有 237bp 大小的條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染。
 
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