細(xì)胞名稱	CMK（人原始巨核細(xì)胞白血病細(xì)胞）
細(xì)胞形態(tài)	單個(gè)，多形，大細(xì)胞懸浮生長，有時(shí)松散粘附（<3%）；2-3%巨大，多核細(xì)胞
疾病	急性巨核細(xì)胞白血病
背景	1985年從一名患有唐氏綜合征和急性巨核細(xì)胞白血病（AML-M7）復(fù)發(fā)的10個(gè)月大男孩的外周血中建立
腫瘤形成	是支原體：DAPI陰性，微生物培養(yǎng)，RNA雜交，PCR檢測   免疫學(xué)：CD3-、CD13+、CD14-、CD15-、CD19-、CD33+、CD34+、CD41+、CD71+、CD235a+；影像學(xué)   指紋圖譜：小衛(wèi)星標(biāo)記的多重PCR顯示了一個(gè)獨(dú)特的DNA圖譜   物種：經(jīng)AST、NP等IEF鑒定為人類
倍增時(shí)間	約40-50小時(shí)
培 養(yǎng) 基	RPMI-1640+10%FBS

 

Cytogenetics:

human flat-moded hypotetraploid karyotype with 8% polyploidy - 85-90<4n>XY, -X, -Y, -2, -3, +5, -6, -6, -8, +11, -15, -15, +16, -17, -19, +21, +22, +7-11mar, add(1)(q31), add(1)(p36), add(3)(q11), del(3)(p14)x2-3, add(5)(q11), add(5)(q13), dup(8)(q11q21), add(8)(q13-21), del(8)(q11), del(9)(p21)x2, add(9)(q11)x2, del(10)(q22q24), der(11;17)(q10;q10), der(11)dup(11)(p13p15)t(5;11)(q11;p15)x1-2, del(11)(q23), add(12)(p13)x2, add(17)(p1?), add(18)(q23)x2-3, add(19)(p13), der(20)t(1;20)(q2?5;q1?2)x2, add(22)(q13) - disomic rearrangement of 20q1 close to common deleted segment, together with additional rearrangements of ch 20 present in markers - matches published karyotype

支原體：DAPI陰性，微生物培養(yǎng)，RNA雜交，PCR檢測

免疫學(xué)：CD3-、CD13+、CD14-、CD15-、CD19-、CD33+、CD34+、CD41+、CD71+、CD235a+；影像學(xué)

指紋圖譜：小衛(wèi)星標(biāo)記的多重PCR顯示了一個(gè)獨(dú)特的DNA圖譜

物種：經(jīng)AST、NP等IEF鑒定為人類

細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a）、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。

三、細(xì)胞凍存：（注：非無血清凍存液方法，無血清凍存液方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃