| Synonyms: | HARA（人肺癌鱗癌細胞） |
| Profile： | Human lung squamous cell carcinoma with PTHrP expression. |
| Species: | human ，sapiens，Homo |
| Tissue: | lung (cancer) |
| Disease: | This cell line expresses PTHrP highly and the bone metastasis is induced extensively by the injection to the heart chamber of nude mouse. Hypercalcemia is induced in mice by hypodermic transplantation of the cell. |
| Gender: | Japanese，male |
| Growth Mode: | adherent |
| Doubling Time: | approx. 30hr |
| DNA Profile: | D5S818:12 D13S317:9 D7S820:12 D16S539:10 VWA:16,17 TH01:7 AM:XY TPOX:8,9 CSF1PO:13 Cell Line Authentication Service |
| Culture Medium: | DMEM+10%FBS We strongly suggest to purchase the complete medium |
| Cryopreservation medium: | 90%FBS+10%DMSO |
| Methods for Passages： | medium change every 3 days. |
| Virus Tested ： | GAPDH(+),CMV(-),EBV(-),HHV6(-),HHV7(-),BKV(-),JCV(-),ADV(-),parvoB19(-),HBV(-),HTLV1(-),HTLV2(-),HIV1(-),HIV2(-),HPV18(-) |
| Isozyme Analysis: | Confirmed as human by NP, G6PD (type B) MD |
| CO2 Conc. | 5% |
| Comments: | STR analysis indicated that the cell line is unique (06/02/2004). |
| 傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 細胞庫無血清凍存液 |
| 細胞描述 | 該細胞系培養(yǎng)所用基礎培養(yǎng)基為 DMEM/F12,配置完全培養(yǎng)基時需加入 10%FBS, 10ng/mL EGF，1%Anti-Anti 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉讓給第三者。 | ||
| 培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) | ||
培養(yǎng)瓶中細胞操作步驟
對于貼壁培養(yǎng)的細胞，寄送前，我們會將培養(yǎng)基充滿整個培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運輸過程中貼壁細胞的脫落。
1. 收到細胞產(chǎn)品后，請注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細檢查是否渾濁、是否細菌污染。因在運輸過程中存在顛簸，且有些細胞對溫度變化也很敏感，可能存在一些細胞脫落漂浮的情況，這些細胞仍是活細胞，請勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
2. 對于貼壁的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8mL左右，隨后將細胞置于含有5%CO的37℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細胞已經(jīng)長滿培養(yǎng)瓶請立即傳代。
3. 對于懸浮的細胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉移培養(yǎng)瓶中的細胞至離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細胞，轉移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有5% CO 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
凍存細胞操作步驟
注意：為保存細胞的高存活率，請收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。
1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 離心
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞并轉移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細胞復蘇的存活率，請將培養(yǎng)基在37℃水浴預熱后使用將細胞置于含有5%CO 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細胞傳代培養(yǎng)
1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS清洗一次。
2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm2培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實際情況增減用量）。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓毎麖呐囵B(yǎng)瓶表面吹落，并使細胞分散。
4. 離心
5. 將細胞置于含有5%
傳代比例：建議 1:2 （以培養(yǎng)瓶底面積計算）
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
