| Synonyms: | HDQ-P1（人乳腺癌細(xì)胞） |
| Background: | established in 1995 from a primary ductal infiltrating breast carcinoma of a 50-year-old Caucasian woman; cells are described in the literature to be estrogen- and progesterone-receptor negative, and to possess a point mutation in p53 and a five-fold amplification of MYC |
| Species: | human (Homo sapiens) |
| Tissue: | breast |
| Disease: | breast carcinoma |
| Gender: | N/A |
| Morphology: | epithelial cells growing adherently in monolayers; |
| Growth Mode: | N/A |
| Doubling Time: | ca. 72 hours |
| DNA Profile: | N/A Cell Line Authentication Service |
| Culture Medium: | DMEM+10%FBS We strongly suggest to purchase the complete medium |
| Cryopreservation medium: | 90%FBS+10%DMSO |
| Mycoplasma: | negative in microbiological culture, RNA hybridization, PCR assays |
| Immunology: | cytokeratin +, cytokeratin-7 +, cytokeratin-8 +, cytokeratin-17 +, cytokeratin-18 +, cytokeratin-19 +, desmin -, endothel -, EpCAM +, GFAP -, neurofilament -, vimentin + |
| Fingerprint: | multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA profile |
| Species: | confirmed as human by cytogenetics |
| Cytogenetics: | human highly-rearranged flat-moded hypertetraploid/hypopentaploid karyotype with 13% polyploidy - 92-107<4n>XX, -X, -X, +1, -3, -3, -3, +5, +5, +5, +6, +7, +7, -8, +10, -13, -13, -14, -15, -15, -16, -16, -17, -17, -18, -18, -18, -19, -19, -20, -20, -21, -21, -22, -22, -22, +28-29mar, add(X)(p2?)x2, add(1)(p36)x2, add(1)(p35), add(1)(q1?2)x2, der(2)t(2;3)(p16;q11), add(5)(p11q3?4)x2, add(5)(q11), der(5)t(5;?;3)(q1;?;p11), der(5)t(5;5)(p1?;q1?4), i(5p), add(6)(p11), add(7)(p14), add(7)(p11)x2, add(7)(q11)x2, add(8)(q21), del(9)(p23), del(9)(p11), i(10p), del(11)(q22), der(12)t(7;12)(q11;q24), add(14)(p11)x2, add(15)(p11), add(16)(p13), add(16)(q23), add(17)(p11), del(17)(p12), add(18)(p11), add(19)(p13), add(19)(q13), del(22)(q12.2) - HDQ-P1 markers |
| Virus | PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HIV-1 -, HIV-2 -, HTLV-I/II -, MLV -, SMRV - |
| 傳代方法 | 第一次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 細(xì)胞庫無血清凍存液 |
| 細(xì)胞描述 | 本庫的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 | ||
| 培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) | ||
細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖詈棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
三、細(xì)胞凍存：（注：非無血清凍存液方法，無血清凍存液方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
