| CBP60698 | |
| I. General information YAPC（人胰腺腺癌細(xì)胞） | |
| Synonyms: | |
| Background: | established from ascites obtained during exploratory laparatomy of a 43-year-old Japanese man with pancreas carcinoma (terminal, no therapy) in December 1993; cells were described as being dependent on autocrinely secreted IL-1alpha |
| Species: | human (Homo sapiens) |
| Tissue: | pancreas |
| Disease: | pancreas carcinoma |
| Gender: | N/A |
| Morphology: | cobblestone-like adherent cells growing in monolayers; |
| Growth Mode: | N/A |
| Doubling Time: | ca. 48 hours |
| DNA Profile: | N/A Cell Line Authentication Service |
| Culture Medium: | RPMI1640+10%FBS We strongly suggest to purchase the complete medium from |
| Cryopreservation medium: | 90%FBS+10%DMSO |
| Mycoplasma: | negative in DAPI, microbiological culture, RNA hybridization, PCR assays |
| Immunology: | cytokeratin +, cytokeratin-7 +, cytokeratin-8 +, cytokeratin-17 (+), cytokeratin-18 +, cytokeratin-19 +, desmin -, endothel -, EpCAM +, GFAP -, neurofilament -, vimentin (+) |
| Fingerprint: | multiplex PCR of minisatellite markers revealed a unique DNA profile |
| Species: | confirmed as human with IEF of AST, NP |
| Cytogenetics: | human near-triploid karyotype with 8% polyploidy - 66-71<3n>XXYY, +3, +7, +8, +9, +10, +14, -17, -18, -19, -20, -22, -22, -22, +3mar, der(1)del(1)(q23-25)inv(1)(p11q21), der(1;5)(q10;q10), add(3)(p11)/del(3)(p11p21)x2, del(5)(p11), add(6)(p21), del(7)(q32), add(9)(p1?), der(9;15)(q10;q10), der(10)t(10;11)(p11;q13)x2, del(12)(p12), add(13)(p11)x2, add(13)(p11), inv(16)(p13q11.2), del(18)(q21), add(20)(p11)/der(20)t(1;20)(p34;p11) - loss of 1p, 3p, 9p, 18q associated with pancreas carcinoma - matches published karyotype |
| Virus | ELISA: reverse transcriptase negative; PCR: EBV -, HBV -, HCV -, HIV-1 -, HIV-2 -, HTLV-I/II -, MLV -, SMRV - |
培養(yǎng)瓶中細(xì)胞操作步驟
對(duì)于貼壁培養(yǎng)的細(xì)胞，寄送前，我們會(huì)將培養(yǎng)基充滿整個(gè)培養(yǎng)瓶，以減少產(chǎn)品運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞的脫落。
1. 收到細(xì)胞產(chǎn)品后，請(qǐng)注意觀察是否有污染。將培養(yǎng)瓶置于倒置顯微鏡下仔細(xì)檢查是否渾濁、是否細(xì)菌污染。因在運(yùn)輸過程中存在顛簸，且有些細(xì)胞對(duì)溫度變化也很敏感，可能存在一些細(xì)胞脫落漂浮的情況，這些細(xì)胞仍是活細(xì)胞，請(qǐng)勿丟棄，可離心富集后傳代使用。
2. 對(duì)于貼壁的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，用真空泵去除培養(yǎng)瓶中的多余培養(yǎng)基，至剩余5-8mL左右，隨后將細(xì)胞置于含有5%CO的37℃恒溫 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，擰松瓶蓋。如果細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶請(qǐng)立即傳代。
3. 對(duì)于懸浮的細(xì)胞，在生物安全柜環(huán)境中，轉(zhuǎn)移培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞至離心管中，離心200×g / 5 - 10 min，去除上清后，用5 mL培養(yǎng)基吹散細(xì)胞，轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)瓶中，隨后置于含有5% CO 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
凍存細(xì)胞操作步驟
注意：為保存細(xì)胞的高存活率，請(qǐng)收到產(chǎn)品后，立即解凍培養(yǎng)。
1.將凍存管置于37℃ 水浴中來回晃動(dòng)，迅速解凍。為避免污染，確保凍存管口置于水面之上。解凍需迅速，大約2分鐘。
2. 一旦凍存管中液體融化后，立即取出，采用 70%酒精噴拭凍存管表面。從此步開始，后續(xù)操作須在生物安全柜中完成。
3.將凍存管中的液體轉(zhuǎn)移到含有5mL完全培養(yǎng)基的離心管中， 離心
4. 用完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞并轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶中。為保證細(xì)胞復(fù)蘇的存活率，請(qǐng)將培養(yǎng)基在37℃水浴預(yù)熱后使用將細(xì)胞置于含有5%CO 的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
貼壁細(xì)胞傳代培養(yǎng)
1. 吸取并棄掉培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基，加入PBS清洗一次。
2. 加入 1.0 mL 0.25（w/v）Trypsin-0.53mM EDTA溶液，并置于37℃培養(yǎng)箱中孵育，直至細(xì)胞從壁上脫落分離。此過程大約需要3至5分鐘（此處為12.5 cm2培養(yǎng)瓶所用體積，可根據(jù)實(shí)際情況增減用量）。
3. 加入2mL完全培養(yǎng)基中和胰蛋白酶，并輕輕吹打?qū)⒓?xì)胞從培養(yǎng)瓶表面吹落，并使細(xì)胞分散。
4. 離心
5. 將細(xì)胞置于含有5%
傳代比例：建議 1:2 （以培養(yǎng)瓶底面積計(jì)算）
培養(yǎng)基換液: 每隔 2 至 3 天。
