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使用目的：

本試劑盒用于測(cè)定樣本中蛋氨酸(Methionine)的含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定標(biāo)本中蛋氨酸(Methionine)水平。用純化的蛋氨酸(Methionine) 抗 體 包 被 微 孔 板 ， 制 成 固 相 抗 體 ， 往 包 被 單 抗 的 微 孔 中 加 入 蛋 氨 酸(Methionine)，和 HRP 標(biāo)記的蛋氨酸(Methionine)抗原，使它們競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，，經(jīng)過(guò)徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。樣本顏色的深淺和樣品中的蛋氨酸(Methionine)的含量呈負(fù)相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中蛋氨酸(Methionine)

的含量。

標(biāo)本要求

1．標(biāo)本處理：

（1）水樣采集后經(jīng) -20℃反復(fù)凍融三次，再經(jīng)玻璃纖維過(guò)濾后，備查

（2）組織

樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相關(guān)文獻(xiàn)提取進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，備查

2．不能檢測(cè)含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 加樣：分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)孔、空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)孔中加 50 微升，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，

然后再加待測(cè)樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

2. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl，空白孔除外。

3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。

4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。

6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

7. 終止：每孔加終止液 50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

8. 測(cè)定：以空白孔調(diào)零，450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD 值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高（樣本 OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6．底物請(qǐng)避光保存。

7．嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

檢測(cè)范圍：

10 pg/mL -500 pg/mL

規(guī)格：

96 人份/盒

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6 個(gè)月