注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
FDA水解酶（Fluorescein diacetate，F(xiàn)DA）試劑盒產(chǎn)品內(nèi)容：
標(biāo)準(zhǔn)液：液體5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑 1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加 5mL 試劑三溶解。
試劑三：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
產(chǎn)品說(shuō)明：
FDA 水解反應(yīng)能很好的反應(yīng)土壤中微生物活性和土壤質(zhì)量的變化以及生態(tài)系統(tǒng)中有機(jī)質(zhì)的轉(zhuǎn)化，是土壤質(zhì)量研究中的重要生物學(xué)指標(biāo)之一。
FDA 是一種無(wú)色化合物，在介質(zhì)中能被許多土壤酶所催化水解，并經(jīng)脫水反應(yīng)，產(chǎn)生酶解終產(chǎn)物熒光素，穩(wěn)定不易被分解，并在490nm處有強(qiáng)吸收峰，通過(guò)檢測(cè) 490nm 處的吸光值變化可計(jì)算得FDA水解酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
操作步驟：
一、樣本處理
稱取風(fēng)干過(guò)30-50目篩土壤約 0.1g，備用。
二、測(cè)定操作表
|
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
| 樣本（g） |
|
| 0.1 | 0.1 |
| 標(biāo)準(zhǔn)液（μL） |
| 100 |
|
|
| 雙蒸水（μL） | 100 |
|
|
|
| 試劑一（μL） | 500 | 500 | 600 | 500 |
| 試劑二（μL） |
|
|
| 100 |
| 充分混勻，30℃，震蕩 1h | ||||
| 試劑三（mL） | 400 | 400 | 400 | 400 |
| 10000g，25℃，離心 5min，取 200μL 上清于微量石英比色皿/96 孔板中測(cè)定 490nm 處吸光值 A，△A1=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管，△A2=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管 | ||||
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。
三、酶活性計(jì)算公式
酶活性定義：每克土壤每天產(chǎn)生 1μmol 熒光素的量為一個(gè)酶活力單位。
FDA 活性（μmol/d/g干重）=（△ A2÷△ A1×C 標(biāo)準(zhǔn)品）×V 反總÷T÷W
=2.4×（△ A2÷△ A1）÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度 100μmol/L；V 反總：反應(yīng)總體積，1mL=1×10-3L；T：反應(yīng)時(shí)間，1/24d；
W：樣本質(zhì)量，g
注意事項(xiàng)：
1. 盡量采用新鮮土樣或者短期低溫保存樣品，否則很難準(zhǔn)確反映酶的活性。
2. 測(cè)定之前進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，若吸光值較高，請(qǐng)進(jìn)行適當(dāng)?shù)南♂屧贉y(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
