正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
土壤硝酸還原酶（Solid-Nitrate Reductase，S-NR）試劑盒測(cè)定意義
S-NR催化土壤中硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，是土壤硝態(tài)氮還原的關(guān)鍵酶。研究 S-NR 的活性對(duì)合理施肥，降低氮素的損失具有重要意義。
測(cè)定原理
S-NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽，NO3ˉ+NADH+H＋→ NO2ˉ+NAD＋+H2O；產(chǎn)生的亞硝酸鹽能夠在酸性條件下，與對(duì)–氨基苯磺酸及α- 萘胺定量生成紅色偶氮化合物；生成的紅色偶氮化合物在540nm有最大吸收峰，可用分光光度法測(cè)定。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：液體 12mL×1 瓶，-20℃保存。
試劑二：液體 4mL×1 瓶，-20℃保存。
試劑三：液體 9mL×1 瓶，4℃保存（如出現(xiàn)結(jié)晶析出，60度水浴溶解后使用）。
試劑四：液體 9mL×1 瓶，4℃保存。
試劑五：標(biāo)準(zhǔn)品儲(chǔ)備液 1mL，-20℃保存。
0.1μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)液的配制：用時(shí)將試劑五稀釋100倍，即取0.1ml加蒸餾水定容至 10ml。
測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至540nm，蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測(cè)定
| 1mL 帶蓋離心管 | 試劑名稱 | |||
| 測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | |
| 風(fēng)干土樣（g） | 0.06 | 0.06 |
|
|
| 0.1μmol/mL標(biāo)準(zhǔn)液（μL） |
|
| 60 |
|
| 蒸餾水（μL） |
| 300 |
| 360 |
| 試劑一（μL） | 225 |
| 225 |
|
| 試劑二（μL） | 75 |
| 75 |
|
| 混勻后，蓋蓋后 37℃水浴 60min，8000g 25℃離心 10min，取上清液 | ||||
| 上清液（μL） | 130 | 130 | 130 | 130 |
| 試劑三（μL） | 85 | 85 | 85 | 85 |
| 試劑四（μL） | 85 | 85 | 85 | 85 |
混勻，顯色 20min 后，4000g，25℃離心 10min，取 200uL 上清液至微量石英比色皿或 96
孔板中，540nm下讀取各管吸光值。標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需測(cè)一次。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。S-NR 活性計(jì)算：
單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μmol NO2ˉ的量為一個(gè)S-NR活力單位。
S-NR（μmol /d/g）=C 標(biāo)準(zhǔn)×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）×V 反總÷W÷T =12×（A 測(cè)定管-A 對(duì)照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.1μmol/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.3mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d； W：樣本質(zhì)量，0.06g。
