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土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC) 試劑盒

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 測定意義:                           

土壤β-葡萄糖苷酶(Solid-β-Glucosidase,S-β-GC) 試劑盒S-β-GC能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。

測定原理:

S-β-GC能夠催化對-硝基苯-β-D吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者400n有特征光吸收。

自備用品

可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水

試劑組成和配制

試劑一甲苯5mL×1瓶,4℃保存;(自備)

試劑粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入13mL蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20℃保存

試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存; 

試劑:液體15mL×1瓶,4℃保存; 

測定步驟:

1、 分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至400nm,蒸餾水調(diào)零。

2、 加樣表

試劑名稱

測定管

對照管

風干土樣(g)

0.02

0.02

試劑一(μL)

10

10

振蕩混勻,使土樣全部濕潤,室溫放置15min

試劑二(μL)

130

 

試劑三(μL)

160

160

混勻, 37℃水浴1h,立即沸水浴煮沸5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻

試劑二(μL)    

 

130

充分混勻,10000g常溫離心10min,取上清液(在EP管或96孔板中加入下列試劑)

上清液(μL)

70

70

試劑四(μL)

130

130

充分混勻,室溫靜置2min后, 400nm處測定吸光值A,計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。

S-β-GC活力計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準條件下測定的回歸方程為y=0.0032x-0.0027;x為標準品濃度(μmol/L),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-β-GC活力(U/g 土樣)= (ΔA+0.0027)÷0.0032×V反總÷W÷T =112.5×(ΔA+0.0027)

T:反應時間,1h=1/24d; V反總:反應體系總體積3×10-4 L;W:樣質(zhì)量,0.02g。

b.用96孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y=0.0016x-0.0027;x為標準品濃度(μmol/L),y為吸光值。

單位的定義:每天g土樣中產(chǎn)生1 μmol對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。

S-β-GC活力(U /g 土樣)= (ΔA+0.0027) ÷0.0016×V反總÷W÷T =225×(ΔA+0.0027)

T:反應時間,1h=1/24d; V反總:反應體系總體積3×10-4 L;W:樣質(zhì)量,0.02g。

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