注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
土壤淀粉酶測(cè)試盒測(cè)定意義
淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉酶主要來自于微生物,
是一種重要的酶制劑,廣泛應(yīng)用于糧食加工、食品、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)。
測(cè)定原理
淀粉酶水解淀粉產(chǎn)生還原糖,可與 3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì),在 508nm 處有
特征吸收峰,顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖量成正比。
需自備的儀器和用品
天平、水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板。
試劑的組成和配制
試劑一:液體 1mL×1 支,4℃保存。
試劑二:液體 8mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。
測(cè)定操作表
對(duì)照管 測(cè)定管
土樣(g) 0.02 0.02
試劑一(μL) 10 10
25℃靜置 15min
試劑二(μL) 110 50
試劑三(μL) 60
充分混勻,37℃震蕩 1h,8000rpm,25℃,離心 10min
上清液(μL) 100 100
試劑四(μL) 100 100
充分混勻,90℃水浴 5min,待冷卻后,于微量石英比色皿/96 孔板中測(cè)定
508nm 吸光值,分別記為 A 對(duì)照管和 A 測(cè)定管,△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。
計(jì)算公式
a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.2525x - 0.034,R² = 0.9917
酶活單位定義:每 g 土樣每天催化生成 1mg 還原糖為一個(gè)酶活力單位。
S-AL(mg/d /g)=(△ A +0.034)÷0.2525×V 反總÷W÷T
= 10.464×(△ A +0.034)÷W
V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.11mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1h;W:樣本質(zhì)量,g。
b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.1263x - 0.034,R² = 0.9917
酶活單位定義:每 g 土樣每天催化生成 1mg 還原糖為一個(gè)酶活力單位。
S-AL(mg/d/g)=(△ A +0.034)÷0.1263×V 反總÷W÷T
=20.928×(△ A +0.034)÷W
V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.11mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1d; W:樣本質(zhì)量,g