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土壤淀粉酶測(cè)試盒

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注意:正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

土壤淀粉酶測(cè)試盒測(cè)定意義

淀粉酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉酶主要來自于微生物,

是一種重要的酶制劑,廣泛應(yīng)用于糧食加工、食品、釀造、發(fā)酵、紡織品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)。

測(cè)定原理

淀粉酶水解淀粉產(chǎn)生還原糖,可與 3,5-二硝基水楊酸反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì),在 508nm 處有

特征吸收峰,顏色深淺在一定范圍內(nèi)與還原糖量成正比。

需自備的儀器和用品

天平、水浴鍋、低溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板。

試劑的組成和配制

試劑一:液體 1mL×1 支,4℃保存。

試劑二:液體 8mL×1 瓶,4℃保存。

試劑三:液體 3mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。

測(cè)定操作表

對(duì)照管 測(cè)定管

土樣(g) 0.02 0.02

試劑一(μL) 10 10

25℃靜置 15min

試劑二(μL) 110 50

試劑三(μL) 60

充分混勻,37℃震蕩 1h,8000rpm,25℃,離心 10min

上清液(μL) 100 100

試劑四(μL) 100 100

充分混勻,90℃水浴 5min,待冷卻后,于微量石英比色皿/96 孔板中測(cè)定

508nm 吸光值,分別記為 A 對(duì)照管和 A 測(cè)定管,△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。

計(jì)算公式

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.2525x - 0.034,R² = 0.9917

酶活單位定義:每 g 土樣每天催化生成 1mg 還原糖為一個(gè)酶活力單位。

S-AL(mg/d /g)=(△ A +0.034)÷0.2525×V 反總÷W÷T

= 10.464×(△ A +0.034)÷W

V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.11mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1h;W:樣本質(zhì)量,g。

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 0.1263x - 0.034,R² = 0.9917

酶活單位定義:每 g 土樣每天催化生成 1mg 還原糖為一個(gè)酶活力單位。

S-AL(mg/d/g)=(△ A +0.034)÷0.1263×V 反總÷W÷T

=20.928×(△ A +0.034)÷W

V 反總:反應(yīng)體系總體積,0.11mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1d; W:樣本質(zhì)量,g

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