植物總糖和還原糖檢測試劑盒(DNS 微板法)
產(chǎn)品簡介：
植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀，常以糖含量作為重要指標(biāo)，單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基，具有還原性，屬于還原糖；多糖和蔗糖等屬于非還原糖，可以利用非還原糖能被酸水解為單糖的特性通過測定水解后的單糖含量對總糖進(jìn)行測定。
植物總糖和還原糖檢測試劑盒(DNS 微板法)檢測原理是還原糖在堿性加熱條件下被氧化成糖酸，3,5-二硝基水楊酸被還原為棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量與棕紅色產(chǎn)物的顏色深淺程度呈一定比例關(guān)系，在 540nm 處用酶標(biāo)儀測定棕紅色物質(zhì)的吸光度，該吸光度值與還原糖含量呈線性關(guān)系，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中的還原糖和總糖的含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
| 編號 名稱 | YC06981 00T | YC06983 00T | Storage |
| 試劑(A): Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 1ml | 2ml | 4℃ |
| 試劑(B): DNS 檢測液 | 10ml | 30ml | 4℃ 避光 |
| 試劑(C): 顯色液(總糖使用) | 5ml | 10ml | RT 避光 |
| 使用說明書 | 1 份 | ||
自備材料：
1、蒸餾水
2、50ml 離心管、1ml 離心管
3、離心機(jī)
4、水浴鍋或恒溫箱
5、酶標(biāo)儀、96 孔板
6、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液
操作步驟(僅供參考)：
1、還原糖的提�。�
①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用 12ml蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。
②50℃水浴 30min，并不時(shí)攪拌，以便還原糖徹底浸出。
③將沉淀和浸出液轉(zhuǎn)移至 50ml 離心管，4000g 離心 5min。
④留取上清液，向沉淀中加入 20ml 蒸餾水，混勻，再次 4000g 離心 5min。
⑤留取上清液，將 2 次獲得的上清液合并，用蒸餾水定容至 100ml(提取液)，混勻，作為還原糖待測液。
2、總糖的水解和提�。�
①稱取植物樣品 0.5~3g，剪碎，加入蒸餾水約 3ml 勻漿，轉(zhuǎn)移至燒杯或三角瓶中，用 12m蒸餾水沖洗研磨器 2~3 次，洗出液也轉(zhuǎn)移至該容器。
②向容器中加入 10ml 6M 鹽酸溶液，攪拌均勻，煮沸 30min，并不時(shí)攪拌。。
③取 2 滴滴加于載玻片上，滴加 1 滴顯色液(約 50ul)，檢查水解是否完全，如已經(jīng)水解完全，則不顯示藍(lán)色。
④水解完畢后，冷卻至室溫，加入 6M 氫氧化鈉溶液，使溶液 pH 至 7.4，用蒸餾水定容至 100ml，混勻，4000g 離心 5min 或過濾。
⑤取上清或?yàn)V液 10ml，用蒸餾水定容至 100ml，成稀釋 10 倍的總糖水解液(提取液)，取 50ul 總糖水解液，測定其還原糖的含量。
3、稀釋葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)：取干凈離心管或試管，按下表操作，依次獲得系列濃度的 Glu 標(biāo)準(zhǔn)。
| 加入物(ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml) | 0.01 | 0.02 | 0.03 | 0.04 | 0.05 |
| 蒸餾水 | 0.04 | 0.03 | 0.02 | 0.01 | 0 |
| 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(mg/ml) | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
4、加樣：取 1ml 離心管，按照下表設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、測定孔，溶液應(yīng)按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡，小心混勻；如果樣品中的糖濃度過高，可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定，樣品的檢測最好能設(shè)置 2~3 平行孔，求平均值。
| 加入物(ul) | 空白孔 | 標(biāo)準(zhǔn)孔 | 測定孔 |
| 蒸餾水 | 50 | － | － |
| 系列 Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1~5 號) | － | 50 | － |
| 提取液 | － | － | 50 |
| DNS 檢測液 | 100 | 100 | 100 |
| 沸水浴中準(zhǔn)確煮沸 5min，取出，自來水冷卻至室溫。補(bǔ)加蒸餾水 250ul。 | |||
5、還原糖測定：混勻，依次抽取 300ul 轉(zhuǎn)移至相應(yīng) 96 孔板中，以空白孔調(diào)零，測定 540nm處標(biāo)準(zhǔn)孔、測定孔的吸光度。
計(jì)算：以系列 Glu 標(biāo)準(zhǔn)(1~5 號)，即標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(mg/ml)為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，作圖得標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)提取液的吸光度在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的葡萄糖濃度。
還原糖的百分含量：
100g 樣品中還原糖含量(g)=(c×VT)/(m×1000)×100=(c×VT)/(m×10)總糖的百分含量：
100g 樣品中總糖含量(g)=(c×N×VT)/(m×1000)×100×0.9
=(c×N×VT)/(m×10)×0.9
式中：c=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查的糖量(mg/ml) VT=提取液的總體積(ml)=100 m=植物樣品的質(zhì)量(g)
N=總糖水解液的稀釋倍數(shù)=10
注意事項(xiàng)：
1、 上述低溫試劑避免反復(fù)凍融，以免失效或效率下降。
2、 待測樣品如不能及時(shí)測定，應(yīng)置于 2~8℃保存，3 天內(nèi)穩(wěn)定。
3、 如果樣品還原糖濃度過高，應(yīng)用蒸餾水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
4、 總糖計(jì)算公式在測定干擾雜質(zhì)很少、還原糖含量相對總糖含量很少時(shí)使用，×0.9 是為了從測定出的總糖水解成單糖中，扣除水解時(shí)所消耗的水量。
5、 6M 鹽酸配制：一般市售的濃鹽酸為 11.6~12M，用蒸餾水或去離子水與濃鹽酸 1：1混合即配制成 6M，鹽酸溶于水會放熱，應(yīng)小心操作，避免傷人。
6、 6M 氫氧化鈉配制：氫氧化鈉 24g 溶解于蒸餾水或去離子水，補(bǔ)至 100ml，氫氧化鈉溶于水會放熱，應(yīng)小心操作，避免傷人。
有效期：12 個月有效。
附錄 1：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：按說明書操作，通過分光光度計(jì)對系列標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行吸光度的測定，其數(shù)值及標(biāo)準(zhǔn)曲線如下(僅供參考)：
| 標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖濃度(mg/ml) | 0.2 | 0.4 | 0.6 | 0.8 | 1.0 |
| 吸光度 | 0.256 | 0.635 | 1.043 | 1.409 | 1.746 |
