【用途】
金黃色葡萄球菌檢測(cè)熒光型試劑盒用于金黃色葡萄球菌檢測(cè)。
【原理概述】：
本試劑盒利用重組酶和單鏈結(jié)合蛋白等酶在39 ℃恒溫下進(jìn)行核酸擴(kuò)增；并利用核酸外切酶切割根據(jù)模版設(shè)計(jì)的特異性分子探針，使熒光監(jiān)測(cè)設(shè)備能實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)片段擴(kuò)增過程的實(shí)時(shí)監(jiān)控。
【產(chǎn)品特點(diǎn)】：
本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短（僅需20 mins）等優(yōu)點(diǎn)，反應(yīng)組分為干粉狀態(tài)，操作簡(jiǎn)便，易于保存。
可適用于各種品牌的熒光定量PCR儀、恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增儀器等熒光檢測(cè)設(shè)備。
【包裝規(guī)格】：
48反應(yīng)/盒
【試劑盒成分】：
| 組成 | 含量 |
| R buffer | 1.2 mL×2管 |
| B buffer | 150 μL×1管 |
| 試劑 | 48份 |
| 使用說明書 | 1份 |
【儲(chǔ)存條件及有效期】：
儲(chǔ)存條件：儲(chǔ)存溫度≤ -20 oC，避光保存，避免重壓、反復(fù)凍融；產(chǎn)品有效期：12個(gè)月。
【操作步驟】：
1.試劑準(zhǔn)備（在試劑準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行）
1.1取出包裝盒中的各組分(凍干粉除外)，室溫放置，待其溫度平衡至室溫后，混勻后瞬時(shí)離心備用。
1.2根據(jù)待測(cè)樣本，陰性對(duì)照，陽性對(duì)照的數(shù)量裝備凍干粉，每個(gè)干粉反應(yīng)管加入45 μL R buffer （注意：R buffer需完全融化混勻，否則會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)效果產(chǎn)生影響）；
2樣本加樣（在樣本處理區(qū)進(jìn)行）
2.1向反應(yīng)管中加入2.5 μL核酸模板（正對(duì)照反應(yīng)請(qǐng)加入試劑盒提供的2.5 μL正對(duì)照模板）；
2.2每個(gè)反應(yīng)管加入2.5 μL B buffer, 蓋好管蓋（對(duì)于多個(gè)反應(yīng)，建議將B buffer加至反應(yīng)管的蓋子內(nèi)側(cè)）；上下顛倒反應(yīng)管8-10次充分混合，混勻后，將反應(yīng)液甩（或快速離心）至管子底部，轉(zhuǎn)移至擴(kuò)增區(qū)。
3 核酸擴(kuò)增（在擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行，請(qǐng)參照各儀器說明書進(jìn)行設(shè)置）
3.1 將反應(yīng)管放入熒光檢測(cè)設(shè)備中并記錄樣本放置順序。熒光檢測(cè)程序設(shè)置為：恒溫39 oC；每30 s采集一次FAM通道熒光值，共40個(gè)循環(huán)；反應(yīng)時(shí)間20 mins。
注：如使用ABI系列PCR儀，請(qǐng)務(wù)必于passive reference和quencher處均選擇“none”。
【結(jié)果判讀】：
1. 建議使用我公司推薦的恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增儀（WL-1）.
陽性判斷：有 “S”型擴(kuò)增曲線，機(jī)器顯示結(jié)果為“+”；
陰性判斷：無 “S”型擴(kuò)增曲線，機(jī)器顯示結(jié)果為“-”；
注：當(dāng)受樣本顏色或其他因素影響，機(jī)器顯示結(jié)果為“+”但并無 “S”型擴(kuò)增曲線時(shí)，結(jié)果判定依舊為陰性。
2. 使用熒光定量PCR設(shè)備時(shí)請(qǐng)?jiān)诖_定擴(kuò)增過程中有類似“S”型擴(kuò)增曲線時(shí)，結(jié)合以下原則進(jìn)行判讀，若無則判定為陰性：
| 序號(hào) | 通道 | Ct值 | 結(jié)果判斷 |
| 1 | FAM | UNDET或40 | 樣本低于檢測(cè)限，報(bào)告為陰性 |
| 2 | FAM | ≤37 | 報(bào)告為陽性 |
| 3 | FAM | 37-40 | 復(fù)檢一次，如仍為37-40，則報(bào)告為陰性 |
注：使用推薦儀器效果最佳。
【注意事項(xiàng)】：
1. 由于試劑盒靈敏度非常高，在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請(qǐng)注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染，并盡量考慮設(shè)置空白對(duì)照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。為了防止污染，實(shí)驗(yàn)需要分區(qū)操作。一區(qū)：檢測(cè)制備區(qū)；二區(qū)，樣本制備區(qū)；三區(qū)，擴(kuò)增及產(chǎn)物分析區(qū)（分區(qū)之間最好進(jìn)行物理性隔離，避免人為因素造成的污染，各分區(qū)的器材請(qǐng)獨(dú)立使用）。
2. 實(shí)驗(yàn)過程中穿戴工作服和一次性手套，試驗(yàn)操作中產(chǎn)生的所有廢棄物及時(shí)處理。
3. 試劑盒保質(zhì)期12個(gè)月。每次使用時(shí)，請(qǐng)取出實(shí)驗(yàn)所需的反應(yīng)單元的數(shù)量，置于冰浴條下并在8小時(shí)內(nèi)使用；剩余部分，請(qǐng)置于存儲(chǔ)條件下。
