cDNA 第二鏈合成的原理是用 RNase H 使 RNA-DNA 雜合鏈中的 RNA 產(chǎn)生切口，再用 DNA Polymerase I 通過切口平移(nick translation)反應(yīng)進(jìn)行RNA 鏈取代合成 cDNA 第二鏈，
本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，含有合成 cDNA 第二鏈的所有試劑（包括 RNase H、E.coli DNA
2. 一管式操作，不需要每次進(jìn)行純化，不丟失寶貴的樣品。
3. 所得雙鏈 cDNA 可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、cDNA
本試劑盒足夠 30 次 80uL 體系的 cDNA 第二連合成反應(yīng)。
| 成分 | 編號(hào) | 十孔盒包裝 |
| 5×cDNA 第二鏈合成緩沖液 | 131005a | 250 μL |
| 20×cDNA 第二鏈合成酶混合液 | 131005b | 60 μL |
| 0.5 M EDTA 溶液 | 130309 | 60 μL |
| 超純水 | 100935 | 1 mL |
| 使用手冊(cè) | 131005sc | 1 份 |
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年
cDNA 第一鏈合成試劑等
一、合成 cDNA 第一條鏈
本試劑盒不提供 cDNA 第一鏈合成試劑，用戶需自備相關(guān)試劑合成 cDNA
第一鏈。
二、合成 cDNA 第二鏈
1. 在冰浴上向 5uL 已經(jīng)完成 cDNA 第一條鏈合成的反應(yīng)體系（逆轉(zhuǎn)錄體系） 中依次加入下表試劑，如果多于 5uL，請(qǐng)只取用 5uL：
注：克隆雙鏈 cDNA 一般需要平末端化，需要此步處理。PCR、SSH 等后續(xù)處理一般不需要把雙鏈 cDNA 平末端化，則可以跳過T4 DNA 聚合酶處理步驟， 直接用 EDTA 終止反應(yīng)。
1. 電泳 5 μL 檢測(cè) cDNA 質(zhì)量。如果 cDNA 在 0.5-10Kb 的范圍內(nèi)呈模糊一片，則 cDNA 合格。如果沒看見 cDNA 或有其他異常，需查找原因后再繼續(xù)。
2. 所得 cDNA 可以直接用于后續(xù)的常規(guī) PCR、real-time PCR、cDNA 文庫(kù)
構(gòu)建、抑制性差減雜交（SSH）等實(shí)驗(yàn)
