貓皰疹病毒 1 型 PCR 試劑盒貓皰疹病毒 1 型（Feline Herpesvirus type 1，FHV-1）屬于皰疹病毒科中的α-皰疹病毒，是貓病毒性鼻氣管炎的病原，可引起貓及其他貓科動物 的眼病及呼吸道疾病。貓皰疹病毒會在結(jié)膜及上呼道上皮細胞內(nèi)和神經(jīng)元細胞內(nèi)復(fù)制增殖，神經(jīng)原的感染會導(dǎo)致終身潛伏感染。慢性潛伏感染是貓皰疹病毒急性感染后的典型結(jié)果，井且間歇性地再活化，排放病毒于口鼻分泌物及結(jié)膜分泌物。因此快速靈敏檢測貓皰疹病毒 1 型具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開發(fā)的試劑盒，它具有下列特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。
2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強，只擴增貓皰疹病毒 1 型，與其他病毒沒有交叉反應(yīng)。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。
| 成份 | 編號 | 十孔盒包裝 |
| PCR MagicMix 3.0 | 90805 | 1 mL（紅蓋） |
| 超純水 | 100935 | 1 mL（亮黃色） |
| 貓皰疹病毒 1 型 PCR 引物混合物 | 13-61610yw | 100 μL（白蓋） |
| 貓皰疹病毒 1 型 PCR 陽性對照 （1×10E8 拷貝/μL） | 13-61610pc | 50 μL（黃蓋） |
| 天凈沙核酸釋放劑 | 61202 | 20 次（1 mL，綠蓋） |
| 使用手冊 | 13-61610sc | 1 份 |
低溫運輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽性對照需要單獨放置，不要污染其
他試劑。
一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼容。本試劑盒免費贈送 20 次天凈沙核酸釋放劑試用裝，其使用手冊可以從本公司網(wǎng)站天凈沙核酸釋放劑或產(chǎn)品編號 61202 下載。
2. 如果有 N 個樣品，則需要做 N+2 個提取，包括一個樣品制備陽性對照和一個樣品制備陰性對照。樣品制備陽性對照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 斑點叉尾鮰病毒 PCR 陽性對照的 1 萬倍稀
釋液而得，樣品制備陰性對照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板 DNA
放冰上待用。
二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40μL 體系）
對 N+2 個樣品，在 PCR 時需要增加一個 PCR 陽性對照和一個 PCR 陰性對照，故需要設(shè)置 N+4 個反應(yīng)。在 N+4 個 PCR 管中分別加入下列成分
| 成分 | N+2 個 樣品管 | PCR 陰性 對照 | PCR 陽性 對照 |
| PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
| 貓皰疹病毒 1 型 PCR 引 物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
| N+2 個樣品 DNA 模板 | 各 18 μL | - | - |
| PCR 陰性對照（水） | - | 18 μL | - |
| PCR 陽性對照（貓皰疹病 毒 1 型 PCR 陽性對照的1 萬倍稀釋液） |
- |
- |
18 μL |
| 過程 | 溫度 | 時間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 5 min |
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PCR 反應(yīng) （35 個循環(huán)） | 95℃ | 15 sec |
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| 55℃ | 15 sec |
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| 72℃ | 60 sec |
| 最后延伸 | 72℃ | 10 min |
三、電泳檢測
取 10-20 μL PCR 產(chǎn)物。電泳檢測 PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix在擴增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加 loading buffer。陽性對照必須有條帶出現(xiàn)，陰性對照必須無任何擴增，否則實驗無效。對沒有擴增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋 10 倍后重復(fù) PCR 擴增以排除 PCR 抑制劑的感染
