1. 一管式操作，用戶(hù)只需要提供樣品即可。
2. 根據(jù)豬線(xiàn)粒體 Cytb（細(xì)胞色素 b）基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，能專(zhuān)一性地檢測(cè)出豬的成分，但不能檢測(cè)其他非豬類(lèi)動(dòng)物成分（如雞、牛、羊等）。
3. 快速，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程（按一個(gè)樣品計(jì)）所需時(shí)間僅為 2.0 小時(shí)。
4. 只需要普通 PCR 儀和凝膠電泳儀，無(wú)需配置貴重儀器設(shè)備。
5. 對(duì)混合樣品中豬成分的檢測(cè)下限為 0.1%， 對(duì)樣品中豬成分的核酸檢測(cè)下限為 1.0ng/µL。
本只能用于科研，足夠 50 次 40uL 體系的常規(guī) PCR
| 成分 | 編號(hào) | 十孔盒包裝（去紙托） |
| 2×PCR MagicMix | 90805 | 1mL（亮黃蓋） |
| 豬源性成分 PCR 引物混合液 | 13-139yw | 100 uL（白蓋） |
| 豬源性成分 PCR 陽(yáng)性對(duì)照 | 13-139pc | 50 uL（黃蓋） |
| 超純水 | 100935 | 1 mL（本色蓋） |
| 天凈沙 DNA 釋放劑試用裝 | 130982 | 50 次（成分見(jiàn)下） |
| 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分一 | 130982a | 50 uL（白蓋） |
| 免 DNA 提取試劑溶液 A 成分二 | 130982 | 100uL（綠蓋） |
| 免 DNA 提取試劑溶液 B | 130982c | 400 uL（紅蓋） |
| 使用手冊(cè) | 13-139sc | 1 份 |
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較
高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。最好在專(zhuān)門(mén)的區(qū)域操作。
一、樣品 DNA 的制備
1. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。如果用本試劑盒自帶的天凈沙 DNA 釋放劑試用裝。則按下面步驟操作
3. 配制溶液 A 工作液。以配制 1mL 工作液（足夠 10 個(gè)樣品）為例：在一干凈塑料管中加入 10uL 溶液 A 成分一，20uL 溶液 A 成分二和 970uL 超純水，充分混合均勻即可。溶液 A 工作液可室溫放置，但最好在一周內(nèi)用完，不要長(zhǎng)期放置。一次檢測(cè)一個(gè)樣品需要 100uL 溶液 A 工作液，1mL 工作液足夠 10 個(gè)樣品。如果待測(cè)樣品數(shù)量為其他數(shù)字，配制的溶液 A 工作液的體積需要做相應(yīng)的調(diào)整。
4. 在標(biāo)記好的 N+2 個(gè)離心管中，加入 1-5mg 固體樣品（半粒芝麻大小，如奶酪）或
5uL 液體樣品（如牛奶）待測(cè)樣品。在樣品制備陽(yáng)性對(duì)照中加入 5uL 陽(yáng)性對(duì)照，在樣品制備陰性對(duì)照中加入 5uL 水。
5. 在每個(gè)管中加入 100 uL 溶液 A 工作液，確保固體樣品被溶液淹埋，如果是液體樣品則震蕩混勻。
6. 95℃保溫 10 分鐘。
7. 待冷卻到常溫后加入 10uL 溶液 B 并混勻得 DNA 釋放液。每個(gè)樣品得到的 DNA
釋放液足夠進(jìn)行 50-100 次 PCR。二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（40 uL 體系）
| 成 份 | 樣品 （用量 1） | 樣品 （用量 2） | 陽(yáng)性對(duì)照 | 陰性對(duì)照 |
| 即用型 PCR Mix 3.0 | 20 uL | 20 uL | 20 uL | 20 uL |
| 豬源性 PCR 引物混合液 | 2 uL | 2 uL | 2 uL | 2 uL |
| 制備的樣品 | 18 uL | 2 uL | 無(wú) | 無(wú) |
| 樣品制備陽(yáng)性對(duì)照 | 不加 | 不加 | 2 uL | 不加 |
| 樣品制備陰性對(duì)照 | 不加 | 不加 | 不加 | 2 uL |
3. 在 N+2 個(gè) PCR 管中加入下列成分，下面以樣品數(shù)為 1 舉例（注意：如果第一次使用天凈沙 DNA 釋放劑，最好每個(gè)樣品設(shè)置兩個(gè)模板用量的 PCR 反應(yīng)，兩個(gè)反應(yīng)的模板使用量差 10 倍，由此確定最佳用量，以后就用效果最好的那個(gè)模板用量）：
4. 輕柔混勻后上機(jī)，按下面參數(shù)進(jìn)行 PCR。
| 過(guò)程 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 預(yù)變性 | 94℃ | 10 分鐘 |
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PCR 反應(yīng) （30 個(gè)循環(huán)） | 94℃ | 45 s |
| 56℃ | 45 s | |
| 72℃ | 45 s | |
| 延伸 | 72℃ | 5 分 |
5. 電泳檢測(cè) PCR 產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的 PCR Mix 在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需
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| 要另外再加 loading buffer。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 121bp。陽(yáng)性對(duì)照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無(wú)任何擴(kuò)增，否則實(shí)驗(yàn)無(wú)效。對(duì)沒(méi)有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，需要用通用引物（如真核生物專(zhuān)一 PCR 引物，需自備）測(cè)試是否有抑制劑或樣品是否濃度達(dá)到 PCR 的要求，如果通用引物也擴(kuò)不出來(lái)，需要濃縮并再次純化 DNA 樣品，或者更換 DNA 提取方法，直到通用引物能夠擴(kuò)增出預(yù)計(jì)大小的片段。 |
