| 乙型肝炎病毒 cccDNA 熒光定量試劑盒共價(jià)閉合環(huán)狀 DNA（covalently closed circularDNA，cccDNA） | |||||||||||||||||||||
| 是乙肝病毒前基因組 RNA 復(fù)制的原始模板，雖含量較少，每個(gè)肝細(xì)胞內(nèi)只有約 | |||||||||||||||||||||
| 5～50 個(gè)拷貝，但對(duì)乙肝病毒的復(fù)制以及感染狀態(tài)的建立具有十分重要的意義， | |||||||||||||||||||||
| 只有清除了 cccDNA，才能徹底消除乙肝患者病毒攜帶狀態(tài)。因此 cccDNA 的 | |||||||||||||||||||||
| 檢測(cè)具有重要的臨床意義，本產(chǎn)品即是乙肝病毒 cccDNA 快速檢測(cè)試劑盒。它 | |||||||||||||||||||||
| 具有下列特點(diǎn)： | |||||||||||||||||||||
| 1. 即開即用，用戶只需要提供病毒 DNA 模板。 | |||||||||||||||||||||
| 2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性高。 | |||||||||||||||||||||
| 3. 熒光定量 PCR 檢測(cè)，qPCR Mix 所含 SYBR Green I 只與雙鏈 DNA 結(jié)合， | |||||||||||||||||||||
| 反應(yīng)特異性強(qiáng)。 | |||||||||||||||||||||
| 4. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
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低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限一年
一、樣品 DNA 和引物的制備
用自選方法提取 HBV cccDNA。注意：病毒 DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈 敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化 HBV DNA，后面的 PCR 再靈敏也不 能提高整體檢測(cè)靈敏度 。 在 引物管中加適量的 水使 引物 的 終濃度 為 10pmol/uL，即 10uM。
二、PCR 檢測(cè)（30 μL 體系） 1. 在 PCR 管中加入下列成
| 自備 cccDNA 模板 | 1-5 μL | 無 | 無 |
| HBV cccDNA 陽性對(duì)照 | 無 | 2 μL | 無 |
| 引物 14-10000f，10uM | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| 引物 14-10000r，10uM | 1 μL | 1 μL | 1 μL |
| 補(bǔ)水到 | 30 μL | ||
注：1. 為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽 性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2. 使用本陽性對(duì)照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和 成分。最好在專門的區(qū)域操作。
2. 建議 PCR 反應(yīng)參數(shù)（具體 PCR 參數(shù)可以根據(jù)儀器不同而自行優(yōu)化）
| 過程 | 溫度 | 時(shí)間 |
| 預(yù)變性 | 95℃ | 10 min |
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PCR 反應(yīng) （45 個(gè)循環(huán)） | 95℃ | 10 s |
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| 52℃ | 16 s |
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| 72℃ | 10 s |
