產(chǎn)品簡介:
免疫熒光標(biāo)記技術(shù)(immunofluorescence technique)是將已知的抗體或抗原分子標(biāo)記上熒光素,當(dāng)與其相對應(yīng)的抗原或抗體起反應(yīng)時,在形成的復(fù)合物上就帶有一定量的熒光素,在熒光顯微鏡下就可以看見發(fā)出熒光的抗原抗體結(jié)合部位,檢測出抗原或抗體。該技術(shù)的主要特點是:特異性強、敏感性高、速度快。
熒光素標(biāo)記抗體簡稱熒光抗體(FA),是目前廣泛用于免疫病理、細胞化學(xué)、流式細胞學(xué)、病毒學(xué)及自身抗體的臨床免疫診斷之中的特異、靈敏、定性和定位相結(jié)合的免疫化學(xué)試劑。用于標(biāo)記的抗體,要求是高特異性和高親和力的。所用抗血清中不應(yīng)含有針對標(biāo)本中正常組織的抗體。一般需經(jīng)純化提取 IgG、IgM 后再作標(biāo)記。
本試劑盒中的熒光素采用高質(zhì)量進口的異硫氰酸熒光素(FITC),F(xiàn)ITC 標(biāo)記抗體的原理是利用FITC上的N=C=S 基團和抗體上游離的-NH2 發(fā)生化學(xué)形成 FITC-抗體結(jié)合物,即熒光抗體。一般一個IgG分子可結(jié)合2-8個分子的FITC。
產(chǎn)品組成:
名稱 | 包裝規(guī)格 |
FITC | 1 支(避光) |
調(diào)整緩沖液 | 50ul |
DMSO | 150ul |
純化柱 | 2支 |
收集管 | 2個 |
產(chǎn)品規(guī)格:標(biāo)記100ug-1mg抗體
標(biāo)記操作步驟:
1. 抗體準(zhǔn)備
1.1. 建議抗體濃度在 1-2mg/ml 之間。
1.2. 抗體中不要含有 BSA 或其它蛋白質(zhì)成分。
1.3. 抗體緩沖液中不要含有氨基的鹽(如:Tris,NaN3等),pH在6.5-8.5為宜。
2. 抗體標(biāo)記
2.1. 取出FITC離心數(shù)秒,將管中FITC干粉甩至管底;
2.2. 管中加入50ul DMSO用移液槍反復(fù)吹打或 vortex 混勻至 FITC 完全溶解;
2.3. 抗體中加入適量調(diào)整緩沖液(每100ul抗體中加入10ul 調(diào)整緩沖液);
2.4. 將溶解后的 FITC 加入抗體中(每100ug抗體中加入4.0ul FITC), 用移液槍反復(fù)吹打或 vortex 混勻。
2.5. 將抗體-FITC 混合物置水平搖床或旋轉(zhuǎn)混勻儀,在搖動狀態(tài)下室溫避光(反應(yīng)管可包裹錫箔紙)反應(yīng) 1h。
注: 如果需要較高 F/P 值,可適當(dāng)延長抗體和FITC偶聯(lián)時間。
3. 游離FITC去除
3.1. 取出純化柱,將純化柱 3000rpm 離心 2min。
3.2. 暫時保留收集管中的緩沖液。
3.3. 將純化柱移至新的收集管上,吸取抗體-FITC偶聯(lián)物置純化柱中填料的表面。如果樣品體積小于50ul,應(yīng)先用3.2保留的緩沖液將液體量補足50ul。上樣體積最大不要超過100ul。
3.4. 待樣品滲入填料后,3000rpm 離心2min。
3.5. 將抗體-FITC 標(biāo)記物 4℃避光保存待用,終產(chǎn)品可4℃可避光保存 1 年。
注意事項:
1. 試劑盒保存在2-8℃, 勿凍存。
2. 試劑盒組份在運輸過程中可能造成顛倒,會使液體或干粉試劑沾到管壁或瓶蓋上。使用前請離心處理,以使附著管壁或瓶蓋的液體或干粉試劑沉積到管底。
3. FITC 需現(xiàn)用現(xiàn)配,溶解后的 FITC 不能長期保存。
4. 純化柱中的緩沖液含有毒性成分疊氮化鈉(NaN3),使用時避免與皮膚,眼睛和黏膜接觸。
5. DMSO屬微毒類,對人體皮膚有滲透性,對眼又刺激作用,使用時避免與皮膚,眼睛和黏膜接觸。
6. 標(biāo)記前抗體的透析,濃縮和濃度測定等操作都會造成抗體量的損失,因此標(biāo)記前準(zhǔn)備抗體時需根據(jù)具體情況考慮最適宜的抗體量。
保存條件:2-8℃避光保存,一年有效。勿凍存。