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通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒

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 通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒是用于基因組DNA擴(kuò)增全基因組的試劑盒,可以方便、簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)的得到穩(wěn)定產(chǎn)量的基因組DNA擴(kuò)增樣品。本產(chǎn)品有如下優(yōu)點(diǎn):

  1. 基于phi29 DNA聚合酶的高保真性、高合成率和超強(qiáng)鏈取代能力。
  2. 可以擴(kuò)增基因組達(dá)上萬倍,具有高產(chǎn)量和高保真性的特點(diǎn)。
  3. 可使用各種來源的樣品,包括全血,干血,發(fā)根,口腔粘膜刮液培養(yǎng)細(xì)胞, 真菌和病毒等。
  4. 操作簡(jiǎn)便快捷,恒溫30℃)反應(yīng),無須PCR儀即可實(shí)現(xiàn)擴(kuò)增。
  5. 產(chǎn)物可用于多種后續(xù)試驗(yàn),包括多重PCR、長(zhǎng)片斷PCR、定量PCR、克隆、 文庫(kù)構(gòu)建、單倍型分析、測(cè)序、基因芯片分析、各種遺傳分析片段差異,

微衛(wèi)星差異,SNP,STR)等。

成 份 編 號(hào) 十孔盒包裝
變性液 100941a 62.5 uL
中和液 100941b 125 uL
WGA Mix 100941c 250uL
Phi 29 DNA 聚合酶10U/uL 100941d 12.5uL
使用手冊(cè) 100941sc 1 份

 

自備試劑 超純水(無 DNA 和 DNase 污染)
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸、-20℃保存, 有效期一年。
使用方法 本產(chǎn)品適用于純化好的基因組DNA。

一、堿變性(堿變性法一般好于熱變性法,推薦用戶使用)

  1. PCR 塑料管中加入不超過 2.5uL 純化好的基因組DNA 或用量在100pg-100ng之間。如果體積不足2.5uL,則用超純水補(bǔ)齊。最好同時(shí)做 一個(gè)不加DNA模板的陰性對(duì)照。
  2. 加入等體積2.5μL)變性液,輕柔吹打混勻。

  1. 室溫放置2-5分鐘。
  2. 加入5uLWGA中和液。此時(shí)樣品總體積為10uL。二、WGA反應(yīng)
  3. 10uL DNA樣品中,加入10 μL WGA Mix,輕柔吹打混合均勻。
  4.  
  5. 加入0.5 uL Phi 29 DNA聚合酶10U/uL)輕柔吹打混合均勻。
  6.  
  7. 30℃保溫3-12小時(shí)。最好使用PCR儀進(jìn)行30℃保溫并打開熱蓋保溫。如果采用30℃水浴,最好在樣品管中加入30-50uL石蠟油以防水分蒸發(fā),因      30℃長(zhǎng)時(shí)間的水浴也能使水分蒸發(fā)到管壁,從而改變反應(yīng)體系中各成分的濃度、降低WGA反應(yīng)效率。如果模板DNA量比較高,WGA三小時(shí)即可檢測(cè)到DNA擴(kuò)增。
  8. 65℃保溫10分鐘使phi29 DNA聚合酶滅活。注:由于phi29 DNA聚合酶DNA外切活性,所以最好將其滅活以免干擾后續(xù)反應(yīng)。
  9. 立即取5-10 uL WGA反應(yīng)液進(jìn)行電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果。

  10. 擴(kuò)增的DNA可以用于后續(xù)試驗(yàn)或當(dāng)冰箱長(zhǎng)期保存
  11. 用本產(chǎn)品擴(kuò)增 10 ng 純化好的藻基因組DNA,反應(yīng)體系為 10 μL,擴(kuò)增時(shí)間為 8 h。 5 μL 樣品電泳,第一泳道為 Marker(大片段為 15  Kb,第 2~5 泳道擴(kuò)增樣品的引物濃度分別為 100,200,300,400 μM。染料為綠如藍(lán)核酸染料
  12. WGA 原理圖圓球表示phi 29DNA 聚合酶
    短藍(lán)線表示隨機(jī)引物
    棕色線表示新合成的DNA
     

 

 
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