抗體修飾熱啟動(dòng)酶 PCR Mix
Abstart PCR Mix
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組成
組分 B110007-0001 B110007-0005
Abstart PCR Mix(2X)
( Mg2+終濃度 2 mM )
1 ml 5 ml
保存方法
-15°C 到 -25°C 保存,有效期見包裝。
產(chǎn)品介紹
Abstart PCR Mix 為預(yù)先混合的 Abstart Taq DNA 聚合酶、
反應(yīng)緩沖液、氯化鎂和 dNTP 的濃縮溶液。DNA 模版和引
物簡(jiǎn)單添加即可開始 PCR 反應(yīng)。常規(guī) PCR 擴(kuò)增的一致性和
效率得以優(yōu)化。
操作流程
1. PCR 反應(yīng)體系的設(shè)置:
1) 溶解并混勻 PCR 反應(yīng)所需的各種溶液。并放置于冰浴
上或冰盒內(nèi)。建議反應(yīng) PCR 液體分裝使用,避免反復(fù)
凍融。
2) 參考下表設(shè)置的反應(yīng),建議 PCR 反應(yīng)體系的配置在冰
浴或在冰盒上進(jìn)行:
試劑 50 μl 反應(yīng)體系
Abstart PCR Mix(2X) 25 μl
Template DNA X μl*
Primer F(20 μM) 1 μl
Primer R(20 μM) 1 μl
雙蒸水或 Milli-Q 水 Up to 50 μl
總體積 50 μl
*對(duì)于不同類型的模板在 50 µl 反應(yīng)體積中推薦用量如下:
哺乳動(dòng)物基因組 DNA:0.1-1 µg;
大腸桿菌基因組 DNA:10-100 ng;
質(zhì)粒 DNA:0.1-10 ng。
過多的模板 DNA 容易導(dǎo)致非特異性的 PCR 產(chǎn)物。
3) 用移液器輕輕吹打混勻或輕微 Vortex 混勻,室溫離心
數(shù)秒,使液體積聚于管底。
4) 各設(shè)置好的 PCR 反應(yīng)管置于 PCR 儀上,開始 PCR 反
應(yīng)。
2. PCR 反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置以擴(kuò)增 1 Kb 目的片段為例:
步驟 溫度 時(shí)間 循環(huán)數(shù)
預(yù)變性 95°C 3 min -
變性 95°C 30 s
退火 (Tm-5)°C 30 s 35 個(gè)循環(huán)
延伸 72°C 1 min
最終延伸 72°C 10 min -
保存 4°C forever -
1) PCR 反應(yīng)的設(shè)置需根據(jù)模板、引物、PCR 產(chǎn)物的長(zhǎng)度
和 GC 含量等條件的不同設(shè)定不同的 PCR 反應(yīng)條件包
括溫度、時(shí)間和循環(huán)數(shù)等。
2) 延伸的時(shí)間設(shè)置需根據(jù) PCR 產(chǎn)物的長(zhǎng)度進(jìn)行設(shè)置,通
常每 kb 產(chǎn)物的延伸時(shí)間為 1 分鐘。例如 PCR 產(chǎn)物的
長(zhǎng)度為 1 kb,則延伸時(shí)間可以設(shè)置為 1 分鐘,PCR 產(chǎn)
物的長(zhǎng)度為 2 kb,則延伸時(shí)間可以設(shè)置為 2 分鐘,以
此類推。
3) 對(duì)于初次進(jìn)行的 PCR,為盡量確保可以擴(kuò)增出預(yù)期的
PCR 產(chǎn)物,可以把循環(huán)數(shù)設(shè)置為 35。對(duì)于需進(jìn)行半定
量或定量的 PCR 反應(yīng)循環(huán)數(shù)一定要進(jìn)行適當(dāng)優(yōu)化,使
PCR 反應(yīng)達(dá)到平臺(tái)期。
#B110007 保存溫度:-20°C
包裝規(guī)格:1 ml/5 ml
Sangon Biotech
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