概述
本試劑提供了進行簡便,靈敏和防污染的PCR檢測系統(tǒng)。核心試劑包含了經(jīng)過優(yōu)化的緩沖液,dNTPs Mix (以dUTP 替代dTTP),抗體修飾熱啟動酶 (Abstart Taq DNA polymerase),UDG酶 (Uracil-DNA Glycosylase)和MgCl2溶液. UDG的作用原理：在PCR反應前50°C,2min反應中,UDG酶可水解PCR反應液中含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物的尿嘧啶堿基和糖磷酸骨架的N-糖苷鍵,釋放游離尿嘧啶。隨后進行95°C,2 min 30 sec熱處理,在UDG酶失活的同時進一步對磷酸骨架水解,從而消除含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物的污染。UDG酶可以作用于單鏈或雙鏈DNA,對RNA無活性。
特點
- 只需加入適量的引物和探針或熒光染料,即可進行熒光PCR檢測。在PCR反應前加入UDG可降解含有尿嘧啶的PCR產(chǎn)物,而對不含尿嘧啶的模板無任何影響,可選擇性水解含有尿嘧啶的 PCR 產(chǎn)物。在反應中Abstart Taq DNA polymerase的加入使得反應具有極強的特異性和高度靈敏度。
應用
熒光定量PCR
組份
Abstart Master PCR Mix (25X),2X Reaction Buffer (Mg2+濃度2 mM)
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