產(chǎn)品及特點(diǎn)

新型布尼亞病毒，  衛(wèi)生部門從蜱蟲中毒者體內(nèi)分離出的病毒�；�?qū)⒈徽J(rèn)定為  一種新型病毒。從目前來看， 這一病毒主要由蜱傳播， 且可以治療， 病死率很低。 目前未發(fā)現(xiàn)人傳染人的病例。布尼亞病毒自然感染見于許多脊椎動(dòng)物和節(jié)肢動(dòng)物  (蚊、  蜱、白蛉等)，  可感染小鼠，  并能在一些哺乳類、鳥類和蚊細(xì)胞培養(yǎng)中生長;  對(duì)人可引起類似流感或登革熱的疾病、出血熱(立夫特谷熱和克里米亞─剛果出血  熱等)及腦炎(加利福尼亞腦炎)。有蚊媒、蜱媒、白蛉媒 3 種傳播類型。 本產(chǎn)品以  探針法熒光定量 RT-PCR 技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測(cè)新型布尼亞病毒的試劑盒， 它具有下列特點(diǎn)：

1.   即開即用，  用戶只需要提供樣品 RNA 模板。

2.   引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。

3.   提供陽性對(duì)照，  便于區(qū)分假陰性樣品。

4.   特異性高，  引物是根據(jù)新型布尼亞病毒高度保守區(qū)設(shè)計(jì)， 不會(huì)跟其他病毒的

RNA 發(fā)生交叉反應(yīng)。

5.   本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。

6.   本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分

編號(hào)

十孔盒包裝

探針法 qRT-PCR 緩沖液

190504a

500 μL（藍(lán)蓋）

探針法 qRT-PCR 酶混合液

190504b

100 μL （紅蓋）

熒光 PCR 專用模板稀釋液

180701

1 mL （黃蓋）

新型布尼亞病毒探針法 qRT-PCR 引物混合液

15-83700yw

100 μL （白蓋）

新型布尼亞病毒 qRT-PCR 探針

15-83700pb

50 μL （棕色管）

新型布尼亞病毒探針法 qRT-PCR

陽性對(duì)照

(1×10E8 拷貝/μL)

60908-83700pc

50 μL （黃蓋）

使用手冊(cè)

15-83700sc

1 份

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，  -20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。

自備試劑

樣品 RNA。

使用方法

一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品 （以 10E2- 10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）  。 由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，  因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行， 千萬不能  污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，  本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照， 只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。

1.   標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7， 6， 5， 4， 3， 2。

2.   用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 RT-PCR 專用模板稀釋液，  最好用帶芯槍 頭，下同） 。

3.   在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震 蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4.   換槍頭， 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所  得)， 充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5.   換槍頭， 在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所  得)， 充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6.   重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 RNA 的制備

7.   如果有 N 個(gè)樣品， 最好設(shè)置 N+2 個(gè)提取， 多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽性 對(duì)照） ，一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照） �？梢杂� 10μL 陽性對(duì)照的 10000

倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣， 以此作為

PC 。 另外用水作為 NC。

8.   用自選方法純化樣品的 RNA， 本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑

盒兼容。也可以選購本公司的柱式病毒 RNAout。

三、  Probe qRT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系，  在樣品制備室進(jìn)行）

9.   如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管， 其中 N+2 個(gè)

用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品， 1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照 （用水做模板），  6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析， 并且只做 1 次重復(fù)， 則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管， 其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品， 1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用 水做模板） ， 1 個(gè)用于 PCR 陽性對(duì)照（用第 4 號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模 板）  。 下面只以定量分析為例描述操作步驟。

10. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。 樣品管和陰性對(duì)照設(shè) 置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照， 并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好

后最后加）：

成分

樣品管

N+2 個(gè)

RT-PCR

陰性對(duì)照

管

標(biāo)準(zhǔn)曲線

樣品管

（2-7 管）

探針法 qRT-PCR 緩沖液

各 10 μL

10 μL

各 10 μL

探針法 qRT-PCR 酶混合液

各 2 μL

2 μL

各 2 μL

新型布尼亞病毒 qRT-PCR 探針

各 1 μL

1 μL

各 1 μL