使用口腔拭子基因組DNA提取試劑盒回收的DNA可適用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、 Southern雜交等實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng) 請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。 1．若緩沖液GA或GB中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解，搖勻后使用。 2．所有離心步驟均使用臺式離心機(jī)，室溫下離心。
操作步驟
使用前請先在緩沖液GD和漂洗液PW中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。
取樣方式：使用棉簽在面頰內(nèi)擦拭10次。
注意：為了保證樣本不被食物或者飲料污染，取樣前 30 min內(nèi)請勿進(jìn)食和飲水。
1. 處理材料：
將在面頰內(nèi)擦拭過的棉簽轉(zhuǎn)置于2 ml離心管中，用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下，加入400 μl緩沖液GA。
注意：如果需要去除RNA，可加入4 μl RNase A（100 mg/ml）溶液（客戶自備，目錄號：RT405-12），振蕩15 sec，室溫放置5 min。
2. 加入20 μl Proteinase K溶液，渦旋10 sec混勻，56℃放置60 min，其間每15 min渦旋混
勻數(shù)次。
3. 加入400 μl緩沖液GB，充分顛倒混勻，70℃放置10 min。此時(shí)溶液應(yīng)變清亮，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴，然后擠壓去除拭子，將盡可能多的裂解液轉(zhuǎn)移至新的離心管
中。
注意1：加入緩沖液GB時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般70℃ 放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA
不純。
注意2：如果由于拭子上細(xì)胞數(shù)少導(dǎo)致提取的基因組DNA少于1 µg，可以在添加緩沖液GB的同時(shí)添加Carrier RNA（客戶自備，目錄號：RT416）。
4. 加200 μl無水乙醇，充分顛倒混勻，簡短離心以去除管蓋內(nèi)壁的液滴。
注意：加入無水乙醇后可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，但不影響DNA提取。
5. 將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱CR2中（吸附柱CR2放入收集管中），12,000 rpm (~13,400×g)離心30 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR2放回收集管
中。
6. 向吸附柱CR2中加入500 μl緩沖液GD（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g)離心30 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR2放回收集管中。
7. 向吸附柱CR2中加入600 μl 漂洗液PW（使用前請先檢查是否已加入無水乙醇），12,000 rpm(~13,400×g)離心30 sec，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR2放回收集管。
8. 重復(fù)操作步驟7。
9. 12,000 rpm (~13,400×g)離心2 min，倒掉廢液。將吸附柱CR2室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
注意：這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶反應(yīng)（酶切、PCR等）實(shí)驗(yàn)。
10. 將吸附柱CR2轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加20-50 μl 洗脫緩沖液TB，室溫放置2-5 min，12,000 rpm (~13,400×g)離心2 min。
注意：洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于20 μl，體積過小影響回收效率。為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱CR2中，室溫放置2 min，12,000 rpm
(~13,400×g)離心2 min。洗脫液的pH對于洗脫效率有很大影響。若用ddH2O做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存
在-20℃，以防DNA降解。
DNA濃度及純度檢測
得到的基因組DNA片段的大小與樣品保存時(shí)間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)�；厥盏玫降腄NA片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測濃度與純度。
DNA應(yīng)在OD260處有顯著吸收峰，OD260值為1相當(dāng)于大約50 μg/ml雙鏈DNA、40 μg/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時(shí)不使用洗脫緩沖液，而使用ddH2O，比值會(huì)偏低，因?yàn)閜H值和離子存在會(huì)影響光吸收值，但并不表示純度低。
選配試劑 RNase A（100 mg/ml）；Carrier RNA儲存條件 該試劑盒置于室溫（15-25℃）干燥條件下，可保存12個(gè)月，更長時(shí)間的保存可置于 2-8℃。2-8℃保存條件下，若溶液產(chǎn)生沉淀，使用前應(yīng)將試劑盒內(nèi)的溶液在室溫放置一段時(shí) 間，必要時(shí)可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀。