訂購貨號：DCRS-A
MagLive 死細(xì)胞去除試劑盒
MagLive Dead Cell Removal Kit
保存：室溫。（開封后可以 2-8°C 保存） 規(guī)格：10 Tests / 25 Tests
簡介：
MagLive 死細(xì)胞去除試劑盒通過負(fù)選擇的磁性分離方法去除細(xì)胞培養(yǎng)過程中的死細(xì)胞和細(xì)胞碎片。MagLive 可以去除死細(xì)胞、細(xì)胞碎片、游離的寡核苷酸。通過這樣的步驟后可以提高細(xì)胞培養(yǎng)的純度，改善數(shù)據(jù)分析的質(zhì)量，并對后續(xù)下游的實驗結(jié)果產(chǎn)生積極的影響，對將來的分子生物學(xué)的細(xì)胞分析更為有效。MagLive 產(chǎn)品不含外源蛋白，如 Annexin-V（膜聯(lián)蛋白 V）。
MagLive 特點：
² 不含 Annexin-V
² 不含外源蛋白，不會污染
² 無菌溶液
² 一步去除死細(xì)胞、細(xì)胞碎片、游離寡核苷酸
² 不需要含鈣（Annexin-V 需要）的緩沖液
² 對于懸浮細(xì)胞尤其適用
² 和臺盼藍(lán)或 PI 死細(xì)胞檢測方法兼容
提供的實驗材料：
MagLive 死細(xì)胞去除溶液：10T (1 mL) / 25T (2.5 mL)
其他未提供的所需實驗材料：
1. 5ml 無菌培養(yǎng)管/試管
2. 15ml 無菌離心管
3. 離心機(jī)
4. 磁性分離器（磁力應(yīng)足夠大，否則納米級磁珠不容易被分離）
5. 移液器及吸頭
6. 無菌 PBS
7. 臺盼藍(lán)/細(xì)胞計數(shù)器等細(xì)胞計數(shù)相關(guān)耗材
實驗步驟：
1. 收集不超過 5mL 的濃度為 1×105～1×106/mL 的懸浮細(xì)胞溶液至 5mL 的無菌聚苯乙烯培養(yǎng)管
/試管中并計數(shù)。
2. 對細(xì)胞懸浮液 300g 離心 5min。去除上清液，用 1mL 無菌 PBS 重懸。
注意：不同于 Annexin V 的細(xì)胞分離方法，本產(chǎn)品不需含 Ca2+緩沖液。
但我們建議對細(xì)胞懸液進(jìn)行血清饑餓處理，因為血清會影響分離效果。而且培養(yǎng)基中游離的蛋白也會影響分離效果，因為游離的蛋白和死細(xì)胞會競爭與磁珠的結(jié)合。我們建議采用無蛋白培養(yǎng)基。
3. 對重懸后的溶液加入 0.1mL MagLive。使用移液器吸頭進(jìn)行輕柔吹吸兩次，以使溶液完全混勻。室溫孵育 5min。
注意：磁性分離的時間不能太長，否則活細(xì)胞會沉降，反而降低活細(xì)胞率。
4. 將試管放置在磁性分離器環(huán)境中 15min。本溶液中的死細(xì)胞、細(xì)胞碎片、游離的寡核苷酸等會被磁珠捕獲并吸附至磁鐵一側(cè)。應(yīng)使試管和磁鐵的距離越小越好。
說明：如果實驗室沒有磁性分離器，可使用更經(jīng)濟(jì)的磁鐵代替。但其磁力應(yīng)足夠分離納米級磁珠�？梢韵炔捎贸Ｒ娂�(xì)胞預(yù)實驗，如 NIH3T3。
5. 保持試管不動。另取 1 支 15mL 無菌離心管。使用移液器吸頭輕柔的吸取細(xì)胞懸液（約 1mL） 轉(zhuǎn)移至新的 15mL 離心管中。注意不要吸取到磁珠層（參考注意事項 4）。
6. 吸取 9mL 無菌 PBS 緩沖液至 15mL 離心管。輕柔混勻，300g 離心 5min。去除上清液。
7. 使用細(xì)胞培養(yǎng)液將離心后的細(xì)胞進(jìn)行重懸。即可以進(jìn)行后續(xù)的實驗了。
以上實驗數(shù)據(jù)為經(jīng)驗數(shù)據(jù)，亦可自行優(yōu)化。以上過程應(yīng)保持在無菌條件下進(jìn)行。
常見問題：
1. 細(xì)胞非懸浮狀態(tài)而是成團(tuán)狀態(tài)，是否可以使用 MagLive 死細(xì)胞去除試劑盒？
答：可以。需要先對成團(tuán)細(xì)胞進(jìn)行消化解離。推薦使用 Mildase 細(xì)胞消化液產(chǎn)品（訂購貨號：
HC0145）或 FCMase 細(xì)胞消化液（訂購貨號：HC0146）。
2. 對需要去除的懸浮溶液中細(xì)胞的濃度是否有要求？
答：有要求。如果細(xì)胞濃度過高會影響并降低死細(xì)胞的去除效率。因此，我們推薦細(xì)胞的濃度為 1×105～1×106/mL，最高不要超過 1×107/mL。
3. 磁性分離后溶液的顏色依然是棕色的而非無色透明是什么原因？
答：本試劑的原理是磁珠分離，但未結(jié)合目標(biāo)死細(xì)胞的磁珠是不容易被磁吸的，所以一定時間內(nèi)溶液顏色并不會完全無色。未吸附的磁珠后續(xù)會被清洗掉（實驗步驟 6）。
注意事項：
1. 如將 MagLive 放置在 4C 環(huán)境，應(yīng)待平衡至室溫后再使用。且應(yīng)在開蓋前漩渦或超聲混勻。
2. 建議先采用常見細(xì)胞預(yù)實驗，如 NIH3T3，一是熟悉該實驗過程，二是驗證實驗所需其他材料可以滿足本實驗要求，如磁性分離器的磁力足夠大。
3. 如果活細(xì)胞率太低，僅使用 MagLive 可能不能達(dá)到一次去除所有細(xì)胞碎片或死細(xì)胞的目的。此情況下，建議結(jié)合使用其他方法，或多次操作，或適當(dāng)增加磁珠的用量。
4. 對于較難存活的細(xì)胞，如不能耐受 PBS 的環(huán)境，建議采用其他方法。
5. 結(jié)合死細(xì)胞等的磁珠被磁性分離后肉眼是看不到細(xì)胞層的，所以在吸取活細(xì)胞懸液的時候要小心，不能攪動到磁性一側(cè)吸附的細(xì)胞層。
6. 未吸附到死細(xì)胞等的磁珠是不容易被磁性分離的，所以在后期細(xì)胞的洗滌過程中一定要把游離的磁珠洗去（實驗步驟 6）。
7. 磁性分離器需要具備分離納米級磁珠的磁力。每次處理的溶液量不宜過多，當(dāng)試管直徑較大時，部分溶液不容易被分離。會影響分離效果。應(yīng)使試管離磁性分離器越近越好。
8. 細(xì)胞懸浮緩沖液不能含有蛋白。否則會降低磁珠結(jié)合死細(xì)胞等的能力，因為游離的蛋白和死細(xì)胞會競爭與磁珠的結(jié)合。
相關(guān)產(chǎn)品：
| 貨號 | 名稱 | 規(guī)格 | 特點 |
| HC0058 | PBS，1×，pH7.2-7.4，杜貝 爾科磷酸鹽緩沖液 | 500ml | 細(xì)胞培養(yǎng)級，不含鈣鎂 |
| HC0736 | 10×PBS緩 沖 液 （ pH 7.2-7.4），無菌溶液，D-PBS | 500ml | 細(xì)胞培養(yǎng)級，不含鈣鎂 |
| HC0149 | PBS + 2% FBS（胎牛血清） | 500ml | 細(xì)胞沖洗 |
| HC0153 | 流式用鞘液，8x | 2.5L | 流式平臺專用鞘液，8 倍無菌濃縮液，節(jié)約運(yùn) 輸成本 |
| HC0145 | Mildase 細(xì)胞消化液 | 100ml | 溫和無毒，替代胰酶對貼壁細(xì)胞的消化，不含 動物酶，無需滅活 |
| HC0146 | FCMase 細(xì)胞消化液 | 100ml | 流式細(xì)胞術(shù)、細(xì)胞計數(shù)等用細(xì)胞消化液，比 Mildase 的消化能力強(qiáng)，可以用于替代胰酶對組織等進(jìn)行溫和消化。 |
注意：以上產(chǎn)品僅供科學(xué)研究，不用于臨床診斷或藥物開發(fā)。
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