銅檢測(cè)試劑盒(Cuprizone微板法)
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
銅是人體重要的微量元素，是酶的重要組成部分如銅藍(lán)蛋白(亞鐵氧化酶)、超氧化物歧化酶、細(xì)胞色素氧化酶等，總含量約為90mg，有90~95%的銅與球蛋白結(jié)合，形成銅藍(lán)蛋白，5~10%的銅與清蛋白結(jié)合，清蛋白可作為血漿銅的載體，銅的檢測(cè)方法有分光光度計(jì)、原子吸收光譜法、中子活化分析法等。
雅吉生物銅檢測(cè)試劑盒(Cuprizone微板法)檢測(cè)原理是在酸性介質(zhì)中與白蛋白結(jié)合的銅從白蛋白中解離出來(lái)，經(jīng)沉淀蛋白質(zhì)后銅離子與Cuprizone絡(luò)合，形成穩(wěn)定的藍(lán)色絡(luò)合物，通過(guò)酶標(biāo)儀測(cè)定620nm處吸光度，形成的藍(lán)色與血清、血漿銅成線性關(guān)系，與標(biāo)準(zhǔn)品比較，根據(jù)公式計(jì)算出銅含量，該檢測(cè)試劑盒在62.8μmol/L以下線性關(guān)系良好，特異性高，較為靈敏。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。
產(chǎn)品組成：
| 名稱 | 100T | Storage |
| 試劑(A):銅標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml) | 1ml | 4℃避光 |
| 試劑(B):銅標(biāo)準(zhǔn)稀釋液 | 5ml | RT |
| 試劑(C):CU酸化液 | 15ml | 4℃ |
| 試劑(D):Lea蛋白沉淀液 | 25ml | 4℃避光 |
| 試劑(E):Cu Assay Buffer | 2x10ml | 4℃ |
| 試劑(F):Cuprizone顯色液 | 1.2ml | 4℃避光 |
| 試劑(G):ddH2O | 10ml | RT |
自備材料：
1、酶標(biāo)儀、96孔板
2、1.5ml離心管或試管
3、離心機(jī)
操作步驟(僅供參考)：
1、制備樣品∶血漿、血清按照常規(guī)方法制備，可以直接用于該試劑盒的測(cè)定，-20℃凍存，用于Cu的檢測(cè)。
2、配制銅標(biāo)準(zhǔn)工作液︰取適量的銅標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)，按銅標(biāo)準(zhǔn)(100μg/ml)∶銅標(biāo)準(zhǔn)稀釋液=1:24的比例配制銅標(biāo)準(zhǔn)(4μg/ml)，即為銅標(biāo)準(zhǔn)工作液;4℃避光保存，3個(gè)月有效。
3、Cu加樣∶最好選用經(jīng)稀鹽酸處理及去離子水清潔的干燥試管或者一次性無(wú)菌聚乙烯1.5ml離心管，以及潔凈96孔板，如果無(wú)法達(dá)到上述要求，應(yīng)盡量避免使用銅污染的器皿，按下表操作。
| 加入物（μl） | 空白管/孔 | 標(biāo)準(zhǔn)管/孔 | 測(cè)定管/孔 |
| ddH2O | 200 | - | - |
| 銅標(biāo)準(zhǔn)(4μg/ml) | - | 200 | - |
| 待測(cè)樣本 | - | - | 200 |
| CU酸化液 | 140 | 140 | 140 |
| 充分混勻，室溫放置10min。 | |||
| Lea蛋白沉淀液 | 200 | 200 | 200 |
| 充分混勻，室溫放置10min , 3000g離心10min，吸取各管上清液 取96孔板按下列步驟操作。 | |||
| 上述上清液 | 100 | 100 | 100 |
| Cu Assay Buffer | 140 | 140 | 140 |
| Cuprizone顯色液 | 10 | 10 | 10 |
4、Cu測(cè)定∶混勻，室溫靜置20min，以空白調(diào)零，酶標(biāo)儀620nm處測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)孔和測(cè)定孔的吸光度(即為A標(biāo)準(zhǔn)和A測(cè)定)。
計(jì)算:
血漿、血清銅(μmol/L)=(A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn)）×62.8
式中∶A測(cè)定=測(cè)定管的吸光度
A標(biāo)準(zhǔn)=標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度
銅標(biāo)準(zhǔn)(4μg/ml)=銅標(biāo)準(zhǔn)(62.8μmol/L)
μg/dl=μmol/L/0.157
參考區(qū)間∶
成年健康人血清銅︰
男性∶10.99~21.98μmol/L(70~140μg/dl)
女性∶12.56~23.55μmol/L(80~150μg/dl)
注意事項(xiàng)∶
1、如果樣品濃度過(guò)高，應(yīng)用去離子水稀釋后重測(cè)，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
2、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用到的水，不可用普通的蒸餾水，盡量采用高純度的去離子水。
3、玻璃器材盡量用10%的鹽酸浸泡24h，取出后用去離子水沖洗后才可以使用。
4、試驗(yàn)中儀器、試管、注射器等盡量避免銅污染。
5、測(cè)定波長(zhǎng)可選600~640nm，檢測(cè)結(jié)果差異不大。
6、該試劑盒呈色穩(wěn)定，顯色后在4~20℃可穩(wěn)定1h。
7、隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，顏色會(huì)變淺或消失，應(yīng)在1h內(nèi)檢測(cè)完畢。
8、Cu Assay Buffer應(yīng)密閉保存，用完立即蓋緊蓋子，防止有效成分揮發(fā)。
9、經(jīng)典標(biāo)準(zhǔn)品采用銅標(biāo)準(zhǔn)(2μg/ml)，如儀器精密干擾小，可以采用銅標(biāo)準(zhǔn)(2μg/ml)，其計(jì)算公式為︰血漿、血清銅(μmol/L)=(A測(cè)定/A標(biāo)準(zhǔn))×31.4。
有效期∶12個(gè)月有效﹔常溫運(yùn)輸，4C保存。
附錄:參考標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍空白調(diào)零，通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定吸光度，銅標(biāo)準(zhǔn)為2μg/ml時(shí)，OD值為0.05~0.07;銅標(biāo)準(zhǔn)為4μg/ml時(shí)，OD值為0.10~0.13;通過(guò)測(cè)定銅標(biāo)準(zhǔn)為0.1、0.5、1、2、4、8、16μg/ml 時(shí)的吸光度，作出其標(biāo)準(zhǔn)曲線
注意∶由于檢測(cè)儀器和操作手法等條件的不同，參考值范圍會(huì)有波動(dòng)，該值僅供參考，對(duì)于要求精確計(jì)算銅含量的，可以采用標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行多點(diǎn)測(cè)定;根據(jù)雅吉生物測(cè)定經(jīng)驗(yàn)顯示，標(biāo)準(zhǔn)品濃度在0.5μg/ml 以下，50μg/ml 以上，標(biāo)準(zhǔn)曲線會(huì)有偏差。
