細胞詳述
神經(jīng)干細胞是存在于哺乳動物體內(nèi)的一種具有多向分化潛能和自我更新能力的細胞，能分化為神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞，其在神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的替代治療前景廣闊。
細胞特性
1) 組織來源于人的正常腦組織。
2) 細胞鑒定：Nestin免疫熒光染色為陽性。
3) 經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
5)細胞生長方式：集落，克隆球狀，半貼壁半懸浮培養(yǎng)。
產(chǎn)品的運輸和保存
視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。
1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復(fù)蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復(fù)蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
2)T-25培養(yǎng)瓶充滿完全培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。
產(chǎn)品使用
1)本產(chǎn)品僅能用于科研
2)本產(chǎn)品未通過直接用于活體動物和人的審核
3)本產(chǎn)品未通過用于活體診斷的審核
一、所需儀器：
離心機
生物安全柜
電動移液器
CO2培養(yǎng)箱
倒置顯微鏡
液氮罐
恒溫水浴鍋
-86℃超低溫冰箱
二、所需試劑：
胎牛血清（FBS）
無菌1×PBS pH=7.2
完全培養(yǎng)基
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
完全培養(yǎng)基（含血清）
細胞培養(yǎng)級DMSO
凍存液：80%FBS+20%DMSO
無菌1×PBS pH=7.2
消化液：0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
異丙醇
三、所需耗材：
離心管（15ml、50ml）
T-25細胞培養(yǎng)瓶
一次性無菌移液管（2ml、5ml、10ml）
1.8ml凍存管
程序降溫盒
四、復(fù)蘇操作步驟：
1.將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到37℃；
2.從液氮罐中取出要復(fù)蘇的細胞，盡快轉(zhuǎn)入恒溫水浴鍋中復(fù)溫，工程中需要不斷震蕩凍存管以提高復(fù)溫速率；
3.將融化了的凍存管中的用移液管轉(zhuǎn)入一直裝有5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中，充分混勻后，300g離心5min；
離心完成后棄去上清，用1ml完全培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入T-25細胞培養(yǎng)中，再加完全培養(yǎng)基4ml，之后轉(zhuǎn)入CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。
五、傳代操作步驟：
1.將需要那傳代的細胞從CO2培養(yǎng)箱中取出，在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，吸棄瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；
2.向培養(yǎng)內(nèi)加入無菌1×PBS 3ml，之后水平放置培養(yǎng)瓶，旋轉(zhuǎn)震蕩培養(yǎng)瓶，使PBS能夠浸潤到培養(yǎng)平面上所都的面積，吸棄PBS；
3.重復(fù)步驟2一次，之后向瓶內(nèi)加入消化液1ml，輕微震蕩后放入37℃CO2培養(yǎng)箱中孵育2-4min；
4.孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，如還有部分細胞為消化下來，可在生物安全柜內(nèi)用移液管吸起消化液，吹打培養(yǎng)平面；
5.向消化下細胞的培養(yǎng)瓶中加入1ml含血清的完全培養(yǎng)基終止消化，然后將培養(yǎng)瓶中的液體轉(zhuǎn)入15ml離心管中，300g離心5min；
6.離心完成后，棄上清，用2ml完全培養(yǎng)基重懸細胞，將重懸后的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)入2個T-25培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各1ml，再向每個培養(yǎng)瓶中各加入4ml完全培養(yǎng)基；
7.水平放置培養(yǎng)瓶，旋轉(zhuǎn)震蕩培養(yǎng)瓶，使細胞均勻分部在培養(yǎng)平面上，然后將培養(yǎng)瓶置于CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
六、 凍存操作步驟：
1.將需要那凍存的細胞從CO2培養(yǎng)箱中取出，在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，吸棄瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；
2.向培養(yǎng)內(nèi)加入無菌1×PBS 3ml，之后水平放置培養(yǎng)瓶，旋轉(zhuǎn)震蕩培養(yǎng)瓶，使PBS能夠浸潤到培養(yǎng)平面上所都的面積，吸棄PBS；
3.重復(fù)步驟2一次，之后向瓶內(nèi)加入消化液1ml，輕微震蕩后放入37℃CO2培養(yǎng)箱中孵育2-4min；
4.孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，如還有部分細胞為消化下來，可在生物安全柜內(nèi)用移液管吸起消化液，吹打培養(yǎng)平面；
5.向消化下細胞的培養(yǎng)瓶中加入1ml含血清的完全培養(yǎng)基終止消化，然后將培養(yǎng)瓶中的液體轉(zhuǎn)入15ml離心管中，300g離心5min；
6.離心完成后，棄上清，用0.5mlFBS重懸細胞，再加入0.5ml凍存液，用移液管充分混勻，之后轉(zhuǎn)入1.8ml凍存管中；
7.將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；
8.第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。
