一、產(chǎn)品簡介:
3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)是非常優(yōu)越的酶免試驗顯色劑,能溶解于多種有機(jī)溶劑和雙蒸水中,為穩(wěn)定的無色溶液,與適量過氧化脲或雙氧水與緩沖液混勻后與過氧化物酶作用產(chǎn)生清晰的藍(lán)色產(chǎn)物,極易觀察。由于其靈敏度高,配制后的工作液穩(wěn)定,加上無致癌特性,被廣泛用于酶聯(lián)免疫(ELISA)試驗和尿試紙的檢測反應(yīng)等,TMB主要應(yīng)用于酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA),經(jīng)典的方法是采用A、B液分開配制,使用前再混合的方法,并且長期存放穩(wěn)定,本試劑一般情況下為無色,有時略顯淺藍(lán)色或淺黃色。
雅吉生物的TMB底物顯色試劑盒(ELISA,HRP顯色)主要由TMB顯色液、TMBbuffer、TMB氧化劑組成,其特點是:
1、靈敏度高;
2、穩(wěn)定性好,顯色終止后讀數(shù)穩(wěn)定;
3、背景低:底物溶液在450nm檢測時OD值一般小于0.05。
該試劑僅用于科研領(lǐng)域,不用于臨床診斷或其他用途。
二、產(chǎn)品組成:
名稱規(guī)格 | 2×50ml | 存儲 |
試劑(A):TMB顯色液 | 50ml | 4℃避光 |
試劑(B):TMB buffer | 50ml | 4℃避光 |
試劑(C):TMB氧化劑 | 100μl | 4℃ |
使用說明書 | 一份 |
三、自備材料:
1、酶標(biāo)儀
2、酶標(biāo)板、96孔板
3、恒溫箱(備選)
4、(備選)終止液:鹽酸或硫酸等
四、操作步驟(僅供參考):
1、用適當(dāng)?shù)母蓛羧萜?/font>(用純凈水反復(fù)沖洗),取試劑(A)、(B)、(C),按A:B:C=5000:5000:4的比例混合,即為TMB顯色工作液,待達(dá)到室溫后即可使用。
2、加液:加完HRP結(jié)合物并溫育一定時間,洗板3~5次,每孔加TMB顯色工作液100μl,在室溫(15~25℃)或37℃下溫育10~30分鐘。
3、(選做)終止:加等體積的1M鹽酸或硫酸溶液終止反應(yīng),孔中反應(yīng)液由藍(lán)色變?yōu)辄S色。
4、讀數(shù):30min內(nèi)在450nm處讀數(shù)。
五、注意事項:
1、本試劑盒給予的TMB氧化劑多于實際使用量,請按比例使用。
2、TMB氧化劑易揮發(fā),請注意密閉保存,以免效率下降,一旦開封請盡快使用。
3、TMB氧化劑有腐蝕性,請勿直接接觸于人皮膚、毛發(fā)等。
4、如果出現(xiàn)高的反應(yīng)背景或沉淀,表明TMB底物反應(yīng)過于強(qiáng)烈。
5、終止反應(yīng)不是必須步驟,如不加終止液應(yīng)顯色完成后立即檢測。
6、一般市售的濃鹽酸為11.6M,濃硫酸為18.3M,但應(yīng)注意其揮發(fā)性。
7、為了避免產(chǎn)生沉淀,可在終止后馬上讀數(shù),或者進(jìn)一步稀釋一抗和/或HRP結(jié)合物,再次進(jìn)行試驗。
8、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
六、有效期:12個月內(nèi)有效。
七、運輸及保存:4℃運輸,4℃保存。