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T7 ARCA加帽加尾 mRNA合成試劑盒

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大多數(shù)真核mRNA的高效翻譯需要在5’末端有一個(gè)7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)、3’末端有一個(gè)Poly(A)尾。

T7 ARCA加帽加尾RNA合成試劑盒可以快速的體外合成帶帽帶尾的mRNA。T7 RNA聚合酶通過(guò)轉(zhuǎn)錄,將抗-反向帽類似物(ARCA)加到mRNA上。經(jīng)DNase I短暫溫育可以去除模板DNA,并在Poly(A)聚合酶的作用下,為加帽的mRNA加Poly(A)尾。利用該試劑盒得到的RNA適用于多種下游應(yīng)用,如RNA結(jié)構(gòu)和功能研究、核酸酶生物化學(xué)研究、RNase保護(hù)分析探針、印跡雜交、反義RNA及RNAi實(shí)驗(yàn)、微陣列分析、顯微注射、體外翻譯和RNA疫苗等。
T7 RNA聚合酶識(shí)別T7 promoter(TTCTAATACGA CTCACTATAGG)以-2位G堿基為起點(diǎn)開始轉(zhuǎn)錄,該試劑盒可以從少量樣本得到高效轉(zhuǎn)錄,單次反應(yīng)可獲得>30 μg的mRNA產(chǎn)物,轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度可達(dá)4000nt以上。轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物80%以上含有7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)、Poly(A)尾長(zhǎng)度>80nt。

組份

名稱 10T 50T
5×ARCA/NTP mix 40 μl 200 μl
5×T7 RNA Pol Buffer 40 μl 200 μl
T7 ARCA Enzyme Mix 40 μl 200 μl
10×EPAP Reaction Buffer 1 ml 1 ml
Poly(A) Polymerase 50 μl 250 μl
RNase Free DNase I 20 μl 100 μl
RNase Free H2O 1 ml 1 ml

原理

T7 ARCA加帽加尾 mRNA合成試劑盒

儲(chǔ)存

-20℃可保存2年,避免反復(fù)凍融。

實(shí)例

T7 ARCA加帽加尾mRNA合成試劑盒
以PCR產(chǎn)物作為模板進(jìn)行體外轉(zhuǎn)錄獲得的RNA,應(yīng)用HaiGene T7 ARCA加帽加尾mRNA合成試劑盒進(jìn)行加帽加尾,如圖:泳道1為體外轉(zhuǎn)錄獲得的RNA,泳道2為加帽加尾后產(chǎn)物。
 
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