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植物根系活力檢測(cè)試劑盒（TTC比色法）

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 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

植物根系是活躍的吸收器官和合成器官，根的生長(zhǎng)情況和代謝水平即根系活力將直接影響植物地上部分的生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)狀況以及最終產(chǎn)量，是植物生長(zhǎng)的重要生理指標(biāo)之一。TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)是一種氧化還原物質(zhì)，是標(biāo)準(zhǔn)氧化電位為80mV 的氧化還原色素，溶解于水為無(wú)色，但還原后即生成紅色而不溶于水的三苯基甲腙(TTF)，TTF比較穩(wěn)定，不會(huì)被空氣中的氧自動(dòng)氧化，所以TTC 常被用作酶試驗(yàn)的氫受體。 植物根系活力檢測(cè)試劑盒(TTC 比色法)，又稱作植物根系脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒，其檢測(cè)原理是當(dāng)測(cè)定植物根系活力時(shí)，以TTC 為底物，保溫1~4 小時(shí)，根系中脫氫酶能夠還原TTC 并生成不溶于水的紅色TTF，再用有機(jī)溶劑(乙酸乙酯或丙酮等)將其從根中提取出來(lái)，用分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀檢測(cè)485nm 處吸光度，進(jìn)而計(jì)算出TTC 的還原量，以該還原量表示脫氫酶活性，并作為植物根系活力的指標(biāo)。該試劑盒主要用于定量測(cè)定植物的根系活力或脫氫酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。 

產(chǎn)品組成：

 

名稱規(guī)格

50T

存儲(chǔ)

試劑(A): TTC

1g

RT 避 光

試劑(B): TTC Assay buffer

250ml

RT

試劑(C): TTC 終止液

100ml

RT

試劑(D): Na2S2O4 粉末

0.1g

RT

使用說(shuō)明書(shū)

一份

  自備材料：

1、蒸餾水、乙酸乙酯
2、離心管或容量瓶、濾紙
3、恒溫箱或水浴鍋、研缽或勻漿器
4、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀、比色杯或 96 孔板 
操作步驟(僅供參考)：
1、配制 TTC 溶液(0.4%)：稱取 0.4g TTC 完全溶解于 100ml 蒸餾水即成，配制成溶液后應(yīng) 4℃避光保存，若變紅應(yīng)棄用。
2、配制 TTC Assay buffer 工作液：將 TTC 溶液(0.4%)與 TTC Assay buffer 等比例混合即成，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，4℃避光保存，若變紅應(yīng)棄用。
3、配制TTF 標(biāo)準(zhǔn)工作液：取0.25mlTTC 溶液(0.4%)置于10ml 離心管或容量瓶，加入少許Na2S2O4粉末(一般2mg 左右)，混勻，產(chǎn)生紅色的不溶于水的紅色顆粒物TTF，加10ml 乙酸乙酯，充分混合溶解顆粒，靜置分層（下層0.25ml 為無(wú)色水層，不可用），上層紅色溶液中TTF 濃度為100μg/ml。
按下表分別移取上層紅色溶液0.25、0.5、1、1.5、2ml 置于離心管或容量瓶中， 用乙酸乙酯補(bǔ)加至 10ml，即獲得 TTF 系列標(biāo)準(zhǔn)管。 

加入物(ml)

0

1

2

3

4

5

TTF 標(biāo)準(zhǔn)工作液

0

0.25

0.5

1

1.5

2

乙酸乙酯

10

9.75

9.5

9

8.5

8

相當(dāng)于 TTF 含量(μg)

0

25

50

100

150

200
4、準(zhǔn)備樣品：取0.2~0.5g 植物須根系，洗凈，用濾紙吸干，完全浸沒(méi)于TTCAssay buffer工作液中，37℃避光孵育1~3h，加入2mlTTC 終止液終止反應(yīng)。同時(shí)做一空白對(duì)照實(shí)驗(yàn)，即根系先完全浸沒(méi)于2mlTTC 終止液以殺死根樣，再加入10mlTTCAssay buffer工作液，37℃避光孵育1~3h。
5、提�。�分別將上述實(shí)驗(yàn)組和空白對(duì)照組的根系取出，濾紙吸干水分，放入研缽或勻漿器中，加入3~4ml 乙酸乙酯，充分研磨或勻漿，以提取出TTF。把紅色提取液(TTF)轉(zhuǎn)移至離心管，并用少量乙酸乙酯把殘?jiān)礈?~3 次，再將洗滌液一并轉(zhuǎn)移至離心管，最后補(bǔ)加乙酸乙酯至10ml，搖勻。
6、測(cè)定：比色杯光徑1.0cm，系列標(biāo)準(zhǔn)管以“0”號(hào)管調(diào)零，測(cè)定1~5 號(hào)管485nm 的吸光度值；樣品管以空白對(duì)照組樣品提取液做參比，調(diào)零，以分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀測(cè)定實(shí)驗(yàn)組樣品提取液在485nm 的吸光度值。 
計(jì)算：以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液TTF 含量(25、50、100、150、200ug)為橫坐標(biāo)，以對(duì)應(yīng)吸光度為縱坐標(biāo)，繪制TTF 標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)回歸方程計(jì)算待測(cè)樣品的TTF 含量或TTC 還原量(μg)，即為根系活力或脫氫酶活性。
根系(脫氫酶)活力[mg/(g.h)]=m/(1000×W×t)
式中：m=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的樣品提取液TTF 含量(μg)= TTC 還原量(μg) W=植物須根系的重量(g)t=孵育時(shí)間(h) 
注意事項(xiàng)：
1、 配制好的 TTC 溶液(0.4%)和 TTC Assay buffer 工作液應(yīng)避光保存，若變紅應(yīng)棄用。
2、 根系種類不同，取樣量可有不同。
3、 根系應(yīng)吸干水分但不能擠壓傷及細(xì)胞，才能測(cè)定準(zhǔn)確。
4、 提取用的研缽或勻漿器、試管、比色皿均應(yīng)保持干燥，沒(méi)有水分。
5、由于本實(shí)驗(yàn)采用有機(jī)溶劑（乙酸乙酯或丙酮）提取TTF，因此不能用一次性塑料比色皿或者酶標(biāo)條進(jìn)行檢測(cè)。建議用石英比色皿或玻璃比色皿檢測(cè)，檢測(cè)完成后用乙醇清洗并用水沖洗干燥即可。
6、 如果沒(méi)有分光光度計(jì)，也可以使用酶標(biāo)儀測(cè)定，但應(yīng)注意酶標(biāo)板每孔檢測(cè)體積。
7、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 
附錄：參考標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：測(cè)定空白對(duì)照，通過(guò)分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度多在0.03-0.07 之間。 測(cè)定TTF 標(biāo)準(zhǔn)在25、50、100、150、200、400μg 時(shí)吸光度，據(jù)此 作出其標(biāo)準(zhǔn)曲線如下：
 
注意：由于檢測(cè)儀器和操作手法等條件的不同，參考值范圍會(huì)有波動(dòng)，該值僅供參考， 對(duì)于要求精確計(jì)算植物根系含量的，可以采用標(biāo)準(zhǔn)曲線多點(diǎn)重復(fù)測(cè)定；根據(jù)  測(cè)定經(jīng)驗(yàn)顯示，TTF 含量在 5μg 以下， 400μg 以上，標(biāo)準(zhǔn)曲線會(huì)有偏差。
有效期：12 個(gè)月有效。

 

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