鏈親和素（SA）是阿維丁鏈霉菌（Streptomyces avidinii）表達(dá)的一種小分子蛋白。本制品為127AA最佳核心結(jié)構(gòu)，每分子SA結(jié)合4個(gè)生物素分子，國(guó)際比活性12~15U/mg。SA與禽類親和素（Avidin，AV）相比特異性更強(qiáng)，與生物素結(jié)合后半衰期長(zhǎng)達(dá)6h，而AV半衰期僅為1h。由于SA不含糖基且等電點(diǎn)接近中性，因此SA在檢測(cè)應(yīng)用中具有比AV更低的非特異性背景。
用途：本制品已廣泛應(yīng)用于制備SA-偶聯(lián)酶制劑（如SA-HRP，SA-AP等），SA-偶聯(lián)熒光素（即熒光染料，如SA-FITC，SA-Cy2，SA-Cy3等）、SA-偶聯(lián)磁珠等，進(jìn)而參與酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)（ELISA）、免疫組化、親和色譜填料、含StrepTagII標(biāo)簽（8-AA寡肽）的蛋白純化、生物傳感器、生物納米微球、預(yù)靶向制藥研究、生物芯片被料等生物技術(shù)領(lǐng)域。
- 優(yōu)點(diǎn)：高親和力，高偶聯(lián)效率。
- 注意事項(xiàng)：
- 1.凍干粉溶解后應(yīng)避免反復(fù)凍融，建議分裝成小包裝后分別凍存。
- 2.凍干粉中含20mMNa2CO3 pH9.5的緩沖體系，若用于包被，酶標(biāo)可以直接使用。若用于膠體金，最好調(diào)節(jié)pH或透析后使用。溶解后立即使用效果最好，不能4℃長(zhǎng)期存放。
- 3.若用于ELISA包板，膠體金烘金，硝酸纖維素膜上用SA劃線后需要烘干保存，包被液或緩沖液中需加入20%蔗糖作為活性保護(hù)劑。
- 【操作步驟簡(jiǎn)述】
- 一、微孔板包被
- 1、用碳酸鈉緩沖溶液（pH 9.6）溶解凍干粉，將濃度稀釋成3-10ug/ml（客戶可設(shè)定梯度進(jìn)行實(shí)驗(yàn)）
- 注意：由于SA等電點(diǎn)是7.4，包被不建議使用中性緩沖液
- 2、用移液器吸取100ul/孔，4℃過夜包被或者37℃包被2h；
- 3、洗滌：倒盡板孔中液體，加200ul洗滌液，靜放三分鐘，反復(fù)三次，最后將反應(yīng)板倒置在吸水紙上，使孔中洗滌液流盡，扣干
- 4、后續(xù)進(jìn)入封閉、洗滌、抗原抗體結(jié)合流程
- 若不立即進(jìn)入下游實(shí)驗(yàn)，包被板需要進(jìn)行烘干保存時(shí)。包被前，將包被液中加入20%蔗糖作為活性保護(hù)劑。
- 二、SA偶聯(lián)磁珠
- 2.1 NHS 活化
- 1、充分混勻磁珠后，取100μl PangoBeads COOH 磁珠到1.5 ml 離心管中，置于磁性分離上，待固液分離后去除上清液；
- 2、取200μl MES溶液（25mM，pH 5.0）加入到離心管中，置于磁性分離上，待固液分離后去除上清液。重復(fù)該步驟1 次； **3、迅速加入新配制的50μl EDC 溶液和50μl NHS 溶液 （均為50mg/ml， 以上述MES 配制）到裝有磁珠的離心管中，漩渦混勻使磁珠充分懸浮，室溫下垂直混合30min； **4、反應(yīng)結(jié)束后，加入100μl 上述 MES 溶液洗滌 2 次；（活化狀態(tài)不宜長(zhǎng)時(shí)間保存， 建議立即進(jìn)行偶聯(lián)）
- 2.2 蛋白偶聯(lián)
- 1、將離心管置于磁性上，分離去除上清液，加入100μl蛋白溶液（25 mM MES，pH 5.0） 輕柔地混勻；（蛋白濃度在0.1-2.0mg/ml）
- 2、在室溫下垂直混合反應(yīng)2h，或在4℃條件下垂直混合過夜；
- 3、反應(yīng)結(jié)束后將離心管置于磁分離架上，磁性分離去除上清液，加入1ml乙醇胺溶液 （3M，pH9.0）洗滌磁珠 2 次；
- 4、加1ml乙醇胺溶液（3M, pH 9.0）于離心管中，渦旋30s，將離心管置于垂直混合 儀中室溫反應(yīng)1-2h；
- 5、反應(yīng)結(jié)束后，將離心管置于磁力架上，待固液分離后移除上清液，然后加入100μl 純化水輕柔渦旋 30s，磁吸分離，重復(fù)該步驟 1 次；
- 6、加入適量的保存液（可根據(jù)需要來確定保存溶液的加入量，以調(diào)整偶聯(lián)配體磁珠的加入適量的保存液（可根據(jù)需要來確定保存溶液的加入量，以調(diào)整偶聯(lián)配體磁珠的濃度）保存于4°，如果固定的生物配體穩(wěn)定，可以在保存溶液中加入0.02%（W/V）疊氮化鈉作為抑菌劑。
- 外觀： 凍干粉
- 敏感性： 對(duì)熱敏感,易吸潮
- 儲(chǔ)存條件： -20℃
- 用途： Applications for enzyme-labeled (HRP, AP) streptavidin: Enzyme immunoassays (EIA), including enzyme-linked immunsorbent assays (ELISA) with biotinylated antibodies Cell and tissue staining (for light microscopy) Western blotting (WB) and other membra
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