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副溶血性弧菌PCR試劑盒

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產(chǎn)品及特點(diǎn) 副溶血性弧菌（Vibrio parahemolyticus）是一種海洋細(xì)菌，主要來源于魚、蝦、蟹、貝類和海藻等海產(chǎn)品。進(jìn)食含有該菌的食物可致食物中毒，也稱嗜鹽菌食物中毒。潛伏期自1小時(shí)至4天不等，多數(shù)為10小時(shí)左右，起病急驟，常有腹痛、腹瀉、嘔吐、失水、畏寒及發(fā)熱，腹痛多呈陳發(fā)性絞痛，常位于上腹部、臍周或回盲部，腹瀉每日3～20余次不等，大便性狀多樣，多數(shù)為黃水樣或黃糊便，約2%～16%呈典型的血水或洗肉水樣便，部分病人的糞便可為膿血樣或粘液血樣，對(duì)人體健康具有巨大危害，因此快速檢測(cè)具有重要意義。本試劑盒根據(jù)熒光定量PCR原理開發(fā)，它具有下列特點(diǎn)：
  1. 即開即用，用戶只需要提供細(xì)菌DNA模板。
  2. 引物經(jīng)過精心優(yōu)化，專一性強(qiáng)，只擴(kuò)增副溶血性弧菌。
  3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。
  4. PCR mix中含上樣染料，PCR后可以直接上樣電泳。
  5. 本試劑盒足夠做40μL體系的PCR 50次。
  6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
  
規(guī)格及成分
成  份 編號(hào) 十孔盒包裝
PCR MagicMix 3.0 90805 1 mL（亮黃蓋）
超純水 100935 1 mL（藍(lán)色）
副溶血性弧菌PCR引物混合液 13-14870yw 100 μL（白蓋）
副溶血性弧菌PCR陽(yáng)性對(duì)照 13-14870pc 100 μL（黃蓋）
天凈沙DNA釋放劑試用裝 130982 50次（試用裝）
使用手冊(cè) 13-14870sc 1份
 
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為一年。陽(yáng)性對(duì)照需要單獨(dú)放置，不要污染其他試劑。  
自備試劑 樣品DNA。  
使用方法 一、樣品DNA的制備
  1. 如果有N個(gè)樣品，必須設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）�？梢杂�10μL陽(yáng)性對(duì)照的10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。
  2. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)細(xì)菌DNA提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的細(xì)菌DNAout或柱式細(xì)菌DNAout。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送50次免DNA提取的天凈沙DNA釋放劑，本產(chǎn)品的裂解液可以直接作為PCR模板，省略了DNA提取步驟。其使用手冊(cè)可聯(lián)系客服發(fā)送。
二、設(shè)置PCR反應(yīng)（40 μL體系）
  1. 對(duì)N+2個(gè)樣品，在PCR時(shí)需要增加一個(gè)PCR陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)PCR陰性對(duì)照，故需要設(shè)置N+4個(gè)反應(yīng)。在N+4個(gè)PCR管中分別加入下列成分：
成分 N+2個(gè)
樣品管		 PCR陰性對(duì)照 PCR陽(yáng)性對(duì)照
PCR MagicMix 3.0 各20 μL 20 μL 20 μL
副溶血性弧菌 PCR引物混合液 各2 μL 2 μL 2 μL
N+2個(gè)樣品DNA模板 各18 μL - -
樣品制備陰性對(duì)照 - 18 μL -
樣品制備陽(yáng)性對(duì)照 - - 18 μL
  1. 按下表設(shè)置PCR反應(yīng)：
過程 溫度 時(shí)間
預(yù)變性 94℃ 5 min
PCR反應(yīng)
（35個(gè)循環(huán)）		 94℃ 20 sec
58℃ 20 sec
72℃ 30 sec
最后延伸 72℃ 10 min
三、電泳檢測(cè)
  1. 取10-20 μL PCR產(chǎn)物。電泳檢測(cè)PCR產(chǎn)物。本產(chǎn)品提供的PCR Mix在擴(kuò)增結(jié)束后可以直接上樣，不需要另外再加loading buffer。預(yù)期的PCR產(chǎn)物長(zhǎng)度為208bp。陽(yáng)性對(duì)照必須有此條帶出現(xiàn)，陰性對(duì)照必須無任何擴(kuò)增，否則實(shí)驗(yàn)無效。對(duì)沒有擴(kuò)增產(chǎn)物的樣品，可以稀釋10倍后重復(fù)PCR擴(kuò)增以排除PCR抑制劑的感染。
  
關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 副溶血性弧菌可視化LAMP擴(kuò)增試劑盒  

 

 
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