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Bst2.0 HNB變色擴(kuò)增試劑盒

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在核酸分子的恒溫?cái)U(kuò)增過程中，無論采用LAMP、HDA、RCA、CPA、SMAP等擴(kuò)增技術(shù)，這種高速度的擴(kuò)增特性，均不可避免的引起假陽性擴(kuò)增。這種假陽性的擴(kuò)增情況在LAMP擴(kuò)增中表現(xiàn)尤為明顯，由于LAMP擴(kuò)增用到很高濃度的引物，因此難免保證有少量錯(cuò)配和引物Dimer，這些輕微的污染都會(huì)導(dǎo)致在LAMP高速擴(kuò)增中造成假陽性。HaiGene優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液，配合獨(dú)有的顯色技術(shù)和陰性控制技術(shù)建立的預(yù)混恒溫mix系列產(chǎn)品，可高靈敏度、高特異性的用于LAMP HNB變色、LAMP紅黃變色、LAMP OG變色、 LAMP 濁度分析、LAMP SYBR Green熒光檢測(cè)、HDA熒光檢測(cè)、RCA熒光檢測(cè)、CPA熒光檢測(cè)、SMAP熒光檢測(cè)的擴(kuò)增反應(yīng)。在LAMP擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)中，與其它公司提供的 DNA/RNA LAMP MasterMix 或 LAMP Mix相比，得益于 Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶的出色性能， Bst 4.0 IsoAmp Red MasterMix具有更快的擴(kuò)增速度和雜質(zhì)耐受性。
Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶對(duì)dUTP底物的超強(qiáng)識(shí)別能力，擴(kuò)增反應(yīng)所需的核苷酸底物dTTP可被dUTP完全取代，因此擴(kuò)增產(chǎn)物均包含dUTP，在配合熱敏UDG的情況下，氣溶膠污染物，將會(huì)在起始反應(yīng)階段被徹底清除。而后續(xù)熱敏UDG在65℃條件下3min內(nèi)，完全不可逆失活；從而既能消除污染物，又能保證核酸正常擴(kuò)增。因此，應(yīng)用該試劑能大大降低LAMP反應(yīng)中由于氣溶膠污染造成的假陽性信號(hào)。

使用特征
  Bst 4.0 MasterMix
特點(diǎn) 單組分預(yù)混
擴(kuò)增用酶 Bst3.0+ThermoStable V
DNA模板 ★★★★★
RNA模板 ★★★★★
擴(kuò)增速度 ★★★★★
反應(yīng)溫度 60-68℃
雜質(zhì)耐受性 ★★★★★

以2019-nCov核酸擴(kuò)增為例三種方法的性能比較
  紅黃變色可視化
（Cat.No.:A3824-01）		 橙綠變色可視化
（Cat.No.:A3824-02）		 熒光法
（Cat.No.:A3824-03）
試劑信息  靶標(biāo)均為N基因，凍干Assay均相同；搭配不同Buffer實(shí)現(xiàn)不同的顯色。
檢測(cè)方法 肉眼觀測(cè) 肉眼觀測(cè) SYBR Green熒光
檢測(cè)設(shè)備 水浴鍋、金屬浴、PCR儀 水浴鍋、金屬浴、PCR儀 定量PCR或恒溫?zé)晒鈨x
陽性判讀方式 黃色為陽性 綠色為陽性 有擴(kuò)增曲線為陽性
反應(yīng)溫度 60-65℃
反應(yīng)時(shí)間 30min 20min 15-18min
靈敏度（100%檢出） 10 copies/test 10 copies/test 10 copies/test
單copy檢出率 10-30% 30-50% 30-50%
假陽性比例 <1% <1% <1%
抗雜質(zhì)能力 +++ +++++ +++++
操作通量 可高通量檢測(cè) 不適宜大量樣本 30-50%

實(shí)例展示
1、A3824-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）
以2019-nCoV 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。
LAMP紅黃變色反應(yīng)
2、A3824-02 搭配 OG 橙綠變色反應(yīng)管（A3821）（肉眼觀察）
以2019-nCoV 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前，下圖為 65 度反應(yīng) 20min 后。
LAMP橙綠變色反應(yīng)
3、A3824-03 用于熒光檢測(cè)（便攜式恒溫檢測(cè)儀）
以2019-nCoV 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起始前，下圖為 65 度反應(yīng) 26min 后。
LAMP熒光擴(kuò)增反應(yīng)
4、A3802 用于HNB變色擴(kuò)增反應(yīng)
采用環(huán)引物對(duì)7個(gè)樣本（HHV-6 DNA核酸模板進(jìn)行恒溫HNB變色檢測(cè)反應(yīng)），NTC為不加模板的對(duì)照，產(chǎn)物以HNB顯色如下圖。
LAMP HNB變色反應(yīng)
5、首先使用含dUTP的Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix擴(kuò)增獲得三種基因產(chǎn)物（AFSV P72,Covid-19 N Gene-1，Covid-19 N Gene-2），然后以105拷貝的含U產(chǎn)物作為模板，分別用Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix（with UDG）和Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix 進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)兩組之間的Ct，結(jié)果為：UDG組在30min內(nèi)幾乎不起峰，無信號(hào)；未加UDG組均在4min之前起峰，表明該Bst4.0 SYBR Green IsoAmp MasterMix（with UDG）具有良好的去除殘留模板的能力。
LAMP防污染擴(kuò)增
關(guān)于LAMP核酸擴(kuò)增的技術(shù)專利與商標(biāo)：LAMP核酸擴(kuò)增技術(shù)專利由日本榮研化學(xué)株式會(huì)社所擁有（專利號(hào)CN1420928A/CN1222614C）。除此外，LAMP商標(biāo)也隸屬日本榮研化學(xué)株式會(huì)社。恒溫?cái)U(kuò)增原料用酶與預(yù)混Mix系列產(chǎn)品，可用于LAMP擴(kuò)增反應(yīng)，但并不僅限于LAMP擴(kuò)增，還可以進(jìn)行RCA (Rolling Circle Amplification)、HDA(Helicase Dependent Amplification)、 SMAP（Smart Amplification Process）、CPA(Crossing Priming Amplification)等恒溫?cái)U(kuò)增方法。

 

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