產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
CellTiter-Lumi Steady發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒(CellTiter-Lumi Steady Luminescent Cell Viability Assay Kit)，簡(jiǎn)稱CTL Steady發(fā)光法細(xì)胞活力檢測(cè)試劑盒或CTL Steady，是一種通過化學(xué)發(fā)光法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)ATP含量從而用于超高信號(hào)穩(wěn)定性、超高靈敏度、超寬線性范圍定量檢測(cè)活細(xì)胞數(shù)目的試劑盒。本產(chǎn)品和同類產(chǎn)品相比，最大的特點(diǎn)是發(fā)光信號(hào)特別穩(wěn)定，1小時(shí)內(nèi)信號(hào)整體上下波動(dòng)范圍通常不超過±10%，特別適用于待測(cè)樣品數(shù)量較多、耗時(shí)較長(zhǎng)且須前后數(shù)據(jù)進(jìn)行比較的多孔板中細(xì)胞活力的大批量連續(xù)測(cè)定，也特別適用于高通量篩選(high-throughput screening)的自動(dòng)化操作系統(tǒng)。
使用說明：
1. 細(xì)胞的準(zhǔn)備：使用適合進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)的96孔板，每孔接種100μl細(xì)胞(如使用384孔板，每孔接種25μl細(xì)胞，具體用量視不同類型的 384孔板而定)，并確保檢測(cè)時(shí)每孔的細(xì)胞數(shù)量在3萬個(gè)以內(nèi)(如使用384孔板宜控制在6千個(gè)以內(nèi))，同時(shí)設(shè)置不含細(xì)胞的培養(yǎng)液孔作為陰性對(duì)照，按照細(xì)胞培養(yǎng)的常規(guī)方法培養(yǎng)細(xì)胞。如有需要，可加入藥物處理細(xì)胞。此外，如有必要，也可以設(shè)置細(xì)胞的濃度梯度，以便后續(xù)確定試劑盒的使用效果。
2. ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線的設(shè)置(選做)：把自備的ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液用PBS或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋成適當(dāng)?shù)臐舛忍荻取３醮螜z測(cè)可以設(shè)置0、3、10、30、100、300、1000、3000nM這幾個(gè)濃度，96孔板每孔加入100μl的標(biāo)準(zhǔn)品。如有必要，在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中可以根據(jù)細(xì)胞中的ATP含量對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度范圍進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。如果用細(xì)胞培養(yǎng)液來稀釋ATP標(biāo)準(zhǔn)品，稀釋后需立即進(jìn)行后續(xù)的發(fā)光檢測(cè)，否則培養(yǎng)液中的ATPase等可以消耗ATP的酶會(huì)導(dǎo)致ATP含量下降。
3. 檢測(cè)試劑的準(zhǔn)備：
a. 融解凍存的CellTiter-Lumi Steady發(fā)光法檢測(cè)試劑，如有必要可適當(dāng)分裝該試劑。經(jīng)測(cè)試反復(fù)凍融5次對(duì)其檢測(cè)效果無顯著影響。
b. 按照96孔板每孔100μl (384孔板每孔25μl)的量，取適量CellTiter-LumiSteady發(fā)光法檢測(cè)試劑，平衡至室溫。
4. 細(xì)胞活力檢測(cè)：
a. 取出細(xì)胞培養(yǎng)板在室溫平衡10分鐘(通常不宜超過30分鐘)。
b. 96孔板每孔加入100μl CellTiter-LumiSteady發(fā)光法檢測(cè)試劑(384孔板每孔25微升)。
c. 室溫振蕩2分鐘，以促進(jìn)細(xì)胞的裂解。
d. 室溫(約25ºC)孵育10分鐘，使發(fā)光信號(hào)趨于穩(wěn)定。
e. 使用具有檢測(cè)化學(xué)發(fā)光功能的多功能酶標(biāo)儀進(jìn)行化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。請(qǐng)根據(jù)儀器要求設(shè)置相應(yīng)的參數(shù)，每個(gè)孔的檢測(cè)時(shí)間一般為0.25-1秒或更長(zhǎng)時(shí)間，具體需根據(jù)儀器的檢測(cè)靈敏度進(jìn)行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整。
根據(jù)化學(xué)發(fā)光讀數(shù)直接計(jì)算細(xì)胞的相對(duì)活力，或根據(jù)ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出ATP的量從而計(jì)算出細(xì)胞的相對(duì)活力。
根據(jù)化學(xué)發(fā)光讀數(shù)直接計(jì)算細(xì)胞的相對(duì)活力，或根據(jù)ATP標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出ATP的量從而計(jì)算出細(xì)胞的相對(duì)活力。
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