產(chǎn)品及特點(diǎn)

Bodian 染色法是美國科學(xué)家 David Bodian 1936 年首創(chuàng)的用于觀察神經(jīng)元、 軸突和樹突內(nèi)神經(jīng)原纖維的浸銀染色法，其工作原理是把石蠟切片浸于銀溶液中 , 再用還原液使銀顆粒沉積于神經(jīng)纖維上并呈棕色或棕黑色。傳統(tǒng) Bodian 法的染色 是在 37℃進(jìn)行，Clark 改良法將溫度改為 60℃ ，本試劑盒即根據(jù)改良方法開發(fā)， 跟具有下列特點(diǎn)：

1.   一站式 ，用戶不需要單獨(dú)購買和配制各種溶液。

2.   降低了背景色深，減輕了血管和膠原纖維的共染現(xiàn)象，便于觀察神經(jīng)纖維。

3.   染色和還原時(shí)間更短，降低了脫片現(xiàn)象。

4.   本試劑盒可用于細(xì)胞涂片、切片和實(shí)體組織的顯色檢測(cè)。

5.   產(chǎn)品穩(wěn)定性好、可以長期保存、不易產(chǎn)生沉淀。

6.   本規(guī)格足夠進(jìn)行 100 次切片的染色 (不含切片制備和脫蠟封固等試劑) ，本產(chǎn)

品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成份

編號(hào)

大紙盒包裝

蛋白銀干粉

160374a

1 克(棕色瓶)

銅箔(5×10cm)

160374b

10 張(0.5g/張)

還原液成分一

160374c1

5g

還原液成分二

160374c2

1g (棕色管)

氯化金  (干粉)

160374d

1g (密封玻璃管)

草酸  (干粉)

160374e

2g

固定劑  (干粉)

160374f

5g

10mL 空塑料瓶

無

1 個(gè)

125mL 空塑料瓶

無

3 個(gè)

使用手冊(cè)

160374sc

1 份

運(yùn)輸及保存

常溫運(yùn)輸和保存 ，有效期一年。

自備試劑

蒸餾水、載玻片、顯微鏡

使用方法

一 ：準(zhǔn)備工作

1.   配制蛋白銀溶液  (以配制 10mL 為例，  足夠 10 張切片)：在干凈的培養(yǎng)細(xì)菌

的玻璃培養(yǎng)皿中加入 10mL 蒸餾水， 再將蛋白銀研磨成粉，稱取 0.1g 然后慢 慢抖入到培養(yǎng)皿中，讓蛋白銀干粉在靜止?fàn)顟B(tài)下緩慢溶解進(jìn)入水中，期間不要 搖晃，直到徹底溶解。蛋白銀溶液必須現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.   配制還原液 (以配制 10mL 為例， 足夠 10 張切片) ：稱 0.5g 還原液成分一和

0.1g 還原液成分二，  加自備蒸餾水 10mL 溶解即可。此溶液不能保存后再使

用 ，必須現(xiàn)配現(xiàn)用 。本試劑盒提供的 10mL 試劑瓶可以反復(fù)使用。

3.   配制氯化金 1%溶液：在本試劑盒提供的 125mL 塑料瓶中加入 100mL 自備

蒸餾水 ，再加入 1g 氯化金溶解待用。

4.   配制草酸溶液：在本試劑盒提供的 125mL 塑料瓶中加入 100mL 自備蒸餾水，

再加入 2g 草酸溶解待用。

5.   配制固定液：在本試劑盒提供的 125mL 塑料瓶中加入 100mL 自備蒸餾水，

再加入 5g 固定劑溶解待用。

二、切片的染色

6.   固定組織并制備厚度為 10- 15um 的切片。制備切片時(shí)最好使用 Bodian 專用

固定液(甲醛原液 5mL、冰乙酸 5mL、80%乙醇 90mL)，但本染色法也跟 其他常用的各種固定液兼容。  本試劑盒不提供固定液。

7.   將切片脫蠟至水。

8.   在 Coplin 染色缸中加入 10mL 蛋白銀溶液，然后加入一張新鮮處理的銅箔(處

理方法：在干凈的培養(yǎng)細(xì)菌的玻璃培養(yǎng)皿中加入 7mL 水和 3mL 自備硝酸，  混勻，用鑷子將一片銅箔  (約 0.5g)  浸入到硝酸溶液中 ，硝酸溶液將去其表 面的氧化層，當(dāng)銅箔表面變成金黃色時(shí)用鑷子取出銅箔并迅速用自來水沖洗干凈，折疊到適當(dāng)大小并放入到裝有蛋白銀溶液的 Coplin 染色缸底部) ，然后放 入切片，將染色缸密封后放 60℃溫箱內(nèi)染色 4~16 小時(shí)(或 37℃24-48 小時(shí)) 。 如果選擇 60℃染色 ，最好每 1 小時(shí)肉眼檢測(cè)一次，當(dāng)切片呈金棕色時(shí)即停止 染色。如染色時(shí)間太短，只有較粗的纖維可被輕微的染上，如果染色過頭會(huì)產(chǎn) 生過深背景。

9.   在蒸餾水內(nèi)稍洗一下，把附著在載玻片和切片表面的染料去掉。洗的時(shí)間不宜

太長 ，否則會(huì)把染色去掉 ，只留下已被浸染的粗纖維。

10. 在新制備的還原液中還原 2-3 分鐘。

11. 用蒸餾水徹底洗去還原液。

12. 在 1mL1%氯化金溶液加 1.5uL 冰乙酸，混勻。將切片放入此 1%氯化金溶液

中調(diào)色 10 分鐘。

13. 用蒸餾水洗凈。

14. 如果此時(shí)切片呈淡紫色或藍(lán)色則跳過此步， 如果還不呈淡紫色， 則將切片放入 到草酸溶液中 2-5 分鐘 ，直到切片呈淺紫色或藍(lán)色時(shí)取出。

15. 用自來水沖洗切片 5 分鐘。

16. 將切片放在固定液中固定 5 分鐘。

17. 自來水洗凈切片。