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Equi-phi29 DNA聚合酶

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Equi-phi29 DNA Polymerase是phi29的改造體,并經(jīng)多次純化分離而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的鏈置換、連續(xù)合成特性(>70kb)的基礎(chǔ)上,提高了滾環(huán)擴(kuò)增的反應(yīng)溫度,該酶酶可以在42℃條件下持續(xù)的進(jìn)行DNA合成(而phi29 DNA 聚合酶在此溫度下反應(yīng)活性很低)。
這種高溫的反應(yīng)特性,在以下幾個(gè)方面對(duì)實(shí)驗(yàn)有明顯的提升:

(1)在NGS測(cè)序中,其提升了高GC含量、回文結(jié)構(gòu)等復(fù)雜模板的延伸能力,使得NGS的覆蓋度更均一,降低測(cè)序所需深度;

(2)高溫的反應(yīng)條件,提升了基因組DNA的WGA產(chǎn)物的合成量,并可以進(jìn)行變溫?cái)U(kuò)增;

(3)降低測(cè)序中Gap區(qū)域,提升單細(xì)胞測(cè)序的數(shù)據(jù)質(zhì)量和完整度;

(4)降低非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物;

(5)提升MDA/RCA等實(shí)驗(yàn)的擴(kuò)增性能和特異性。
此外,Equi-phi29 DNA Polymerase仍然具有很強(qiáng)的3’-5’外切酶校讀功能,合成的DNA片段保真性高。該酶的外切酶活性較強(qiáng),因此合成過程中引物需要3’端硫代修飾,以降低外切活性對(duì)引物的切割效應(yīng)。

主要特征

  • 超強(qiáng)鏈置換能力
  • 連續(xù)合成能力
  • 擴(kuò)增的高保真性

應(yīng)用

  • DNA恒溫滾環(huán)擴(kuò)增
  • 需強(qiáng)鏈置換和DNA連續(xù)合成的反應(yīng)
  • 質(zhì)?焖購(fù)制
  • 高保真快速復(fù)制

儲(chǔ)存

-20℃可保存3年。

功能測(cè)試

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