注 意：正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
ICDHc（EC 1.1.1.42）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，催化異檸檬酸脫氫脫羧生成 α-酮戊二酸，同時(shí)還原NADP+生成NADPH。ICDHc是細(xì)胞質(zhì)中除了磷酸戊糖途徑外又一種NADPH重要來源，在逆境中該酶活性通常會發(fā)生顯著變化。
測定原理：
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng)，在340 nm下測定NADPH濃度的增加。
所需的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體50 mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1支，4℃保存；
試劑三：粉劑×1支，4℃保存；
試劑四：粉劑×1支，-20℃保存；
樣本的前處理：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定步驟：
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑二轉(zhuǎn)移至試劑一中充分溶解，置于37℃(哺乳動物)或25℃（其它物種）水浴中預(yù)熱10min左右；用不完的試劑4℃保存。
3、 在試劑三中加入550μL蒸餾水充分溶解，置于37℃(哺乳動物)或25℃（其它物種）水浴中預(yù)熱10min左右；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
4、 在試劑四中加入550μL蒸餾水充分溶解，置于37℃(哺乳動物)或25℃（其它物種）水浴中預(yù)熱10min左右；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
5、 操作表：
| 試劑名稱（μL） | 測定管 |
| 試劑一 | 750 |
| 試劑三 | 10 |
| 試劑四 | 10 |
| 樣本 | 30 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí)；混勻，在340nm波長下記錄20s時(shí)的初始吸光度A1和2min20s時(shí)的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
