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注 意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
GST是一種具有多種生理功能的蛋白質(zhì)家族，主要存在于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。GST是體內(nèi)解毒酶系統(tǒng)的重要組成部分，主要催化各種化學(xué)物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物與GSH的巰基共價(jià)結(jié)合，使親電化合物變?yōu)橛H水物質(zhì)，易于從膽汁或尿液中排泄，達(dá)到將體內(nèi)各種潛在或具備毒性的物質(zhì)降解并排出體外的目的。因此，GST在保護(hù)細(xì)胞免受親電子化合物的損傷中發(fā)揮著重要的生物學(xué)功能。此外，因?yàn)?/font>GST具有GSH-Px活性，亦稱為non-Se GSH-Px，具有修復(fù)氧化破壞的大分子如DNA、蛋白質(zhì)等的功能。注意，GST催化的反應(yīng)減少GSH含量，但是不增加GSSG含量。
測(cè)定原理：
GST催化GSH與CDNB結(jié)合，其結(jié)合產(chǎn)物的光吸收峰波長(zhǎng)為340nm；通過測(cè)定340nm波長(zhǎng)處吸光度上升速率，即可計(jì)算出GST活性。
自備儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配置：
試劑一：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體45mL×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5 mL蒸餾水溶解。
粗酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測(cè)。
2. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3. 血清等液體：直接測(cè)定。
測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，用蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三放在25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）保溫。
3. 測(cè)定管：取1mL石英比色皿，加入100μL上清液，900μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光度變化，記錄10 s和310 s吸光度為A1和A2。
