植物銨態(tài)氮試劑盒說明書
分光光度法50管/48樣
注 意： 正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
氮素是構成生物體的一種必需元素，自然界中的氮素循環(huán)包括許多轉化作用�？諝庵械牡獨獗还痰⑸锛爸参锱c微生物的共生體固定成氨態(tài)氮，經(jīng)過硝化微生物的作用轉化成硝態(tài)氮，后者被植物或微生物同化成有機氮化物，植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。
測定原理
α-氨基酸與水合茚三酮溶液一起加熱，經(jīng)氧化脫氨變成相應的α-酮酸，酮酸進一步脫羧變成醛，水合茚三酮則被還原，在弱酸環(huán)境中，還原型茚三酮，氨和另一分子水合茚三酮反應， 縮合生成藍紫色物質(zhì)，在580nm處有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、研缽、常溫離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。
試劑組成和配制
提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體15mL×1瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1支，4℃避光保存。臨用前加0.5mL蒸餾水充分溶解。
試劑三：液體25mL×1瓶，4℃保存。
樣本處理
按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，室溫勻漿后于25℃，12000g離心10min，取上清待測。
測定操作表
|
| 空白管 | 測定管 |
| 樣本（μL） |
| 200 |
| 蒸餾水（μL） | 200 |
|
| 試劑一（μL） | 300 | 300 |
| 試劑二（μL） | 10 | 10 |
| 充分混勻，沸水浴5min后自然冷卻10min | ||
| 試劑三（μL） | 500 | 500 |
| 充分混勻，于1mL玻璃比色皿，蒸餾水調(diào)零，測定580nm處吸光值A，分別記為A空白管和A測定管，△A=A測定管-A空白管 | ||
注意：空白管只需測定一次。
計算公式
標準曲線：y=0.1535x-0.0279，R2=0.999NH4+—N含量（μg/g 鮮重）=（△A+0.0279）÷ 0.1535×V反總÷（W×V樣÷V樣總）
= 32.9×（△A+0.0279）÷W
V反總：反應總體積，1.01mL；V樣：反應體系中加入樣本體積，0.2mL；V樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質(zhì)量，g
注意事項
1. 提取好的待測液盡快測定，低溫保存不得超過24小時。
2. 沸水浴時間不宜過長，否則會對測定結果有影響。
3. 顯色后20min內(nèi)完成測定。
4. 最低檢出限為18μg/g。
