細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。 AnnexinV是一種分子量為35~36kD的Ca2+依賴(lài)性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過(guò)程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸（Phosphatidylserine，PS）高親和力特異性結(jié)合。以標(biāo)記了FITC的 AnnexinV作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡可檢測(cè)細(xì)胞凋亡的發(fā)生。
Propidium iodide（PI）是一種核酸染料，它不能透過(guò)完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜破裂，因此PI能夠?qū)⒓?xì)胞核染紅。將AnnexinV與PI聯(lián)合使用，可以區(qū)分活細(xì)胞（FITC/PI均為陰性）、凋亡早期 細(xì)胞(FITC陽(yáng)性、PI均為陰性)、凋亡晚期或死細(xì)胞(FITC/PI均為陽(yáng)性)。
本細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒使用改進(jìn)型的高純度FITC染料，其在紅色通道（690nm）無(wú)發(fā)射光，因此極大的減少了對(duì)紅色通道的干擾。使用該試劑盒進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)時(shí)熒光相互干擾更小、檢測(cè)更準(zhǔn)確。
組分 | ||||||||||
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應(yīng)用 | ||||||||||
| 細(xì)胞凋亡檢測(cè) | ||||||||||
儲(chǔ)存 | ||||||||||
| 2～8℃，有效期1年。 | ||||||||||
注意事項(xiàng) | ||||||||||
| 1. 整個(gè)操作過(guò)程動(dòng)作要盡量輕柔，勿用力吹打細(xì)胞，盡量在4℃下操作。 2. 反應(yīng)完畢后請(qǐng)盡快檢測(cè)，反應(yīng)1 小時(shí)后熒光強(qiáng)度就開(kāi)始衰變。 3. Annexin V-FITC 和 Propidium iodide 是光敏物質(zhì)，在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。 4. 試驗(yàn)操作過(guò)程中佩戴手套等防護(hù)用品。 5. 試驗(yàn)開(kāi)始前將一定量的 10×Annexin V Binding Buffer 用超純水（1:9）稀釋至 1×備用。 | ||||||||||
實(shí)例 | ||||||||||
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| 圖：將融合度90%的Hela細(xì)胞分兩組，一組作為對(duì)照組正常培養(yǎng)，另一組向培養(yǎng)基中加入終濃度為500μM的H2O2處理1h，后收集細(xì)胞，用細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒（HaiGene,S0185）處理后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)，用Flowjo軟件分析，結(jié)果如圖。注：橫坐標(biāo)為FITC染色，縱坐標(biāo)為PI染色。 | ||||||||||
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