RAPA3G 動(dòng)物組織直擴(kuò) PCR 試劑盒

Cat. No.: YS0609          80T(50 pL 體系)

描述：RAPA3G  DNA 聚合酶為經(jīng)電子重構(gòu)架的第三代 Taq DNA 聚合酶，第三代 DNA 聚合酶具有高度的雜質(zhì)耐受性、 長(zhǎng)片段擴(kuò)增能力、高擴(kuò)增成功率、高產(chǎn)量，這些特點(diǎn)使得 RAPA3G 系列產(chǎn)品可用于粗制樣品的直接擴(kuò)增，無(wú)需核酸純 化步驟。 該 PCR  Mix 具有 5’-3’的聚合酶活性、 5’-3’的外切 酶活性、3’-5’的外切酶活性，產(chǎn)物部分帶有”A“尾巴，部 分為平末端，因此產(chǎn)物可用于 TA 克隆或平端克隆。

特點(diǎn)和用途：

(1)高雜質(zhì)耐受性：該 PCR Mix 可直接使用血液、蛋白含 量較高的動(dòng)物組織材料進(jìn)行 PCR 擴(kuò)增，無(wú)需基因組提取。

(2) 高效的快速 DNA 釋放劑：盡管該 PCR  Mix 可以直接 使用組織細(xì)胞材料進(jìn)行擴(kuò)增，但我們?nèi)匀煌扑]采用 DNA 釋 放劑進(jìn)行樣本的快速前處理(約需要 5min，可高通量操作)。 DNA 釋放劑的前處理，使得制備的DNA 模板可以進(jìn)行多次、 多基因擴(kuò)增，并長(zhǎng)期保存 DNA，經(jīng) DNA 釋放劑處理的樣本， 在室溫條件下放置 1 個(gè)月， 無(wú)任何后續(xù)影響，-20 可長(zhǎng)期保 存。

(3) 快速 PCR：該酶具有 6kb/min 以上的擴(kuò)增速度，可顯 著的縮短 PCR 的擴(kuò)增時(shí)間，在常規(guī)測(cè)試條件下， 10s 的延 伸時(shí)間可完成 1kb 的基因組 DNA 擴(kuò)增。

(4) 粗制樣品的擴(kuò)增能力：擴(kuò)增能力>4kb。

(5)高保真性能： 該制品包含一定比例的 RAPA HiFi 超保 真 DNA 聚合酶， 因此其具有一定的保真性能(經(jīng)藍(lán)白斑測(cè) 試，其保真性能約為 Taq DNA 聚合酶的56 倍)。

(6) 熱啟動(dòng)， 防止非特異性擴(kuò)增： RAPA3G 系列產(chǎn)品均采 用 HaiGene 專(zhuān)有的熱啟動(dòng)技術(shù)，確保 50 度以下完全無(wú)活性， 僅有 95 度加熱 5min 以后才能恢復(fù)其活性，因此可最大限度 的提高擴(kuò)增的特異性， 減少非特異性產(chǎn)物的產(chǎn)生。

包裝：

注意：2×RAPA3G PCR Mix (with Dye)制品可單獨(dú)訂購(gòu)，貨 號(hào)， A0607。

儲(chǔ)存： 長(zhǎng)期儲(chǔ)存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置 于 4°C  (3 個(gè)月)保存。

使用方法

1. DNA 釋放

(1) 采用加熱法：取 2- 10 個(gè)毛發(fā)囊、1- 10mg 動(dòng)物組織等 材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 pl 快速 DNA 釋放劑 A，于 PCR 儀中 98°C 加熱 5min，加熱完畢后加入 50 pl    快速 DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可使用。

(2) 采用鋼珠研磨法：取 1- 10mg 動(dòng)物組織等材料， 放入 到 2ml EP 管中，加入 250 pl 快速 DNA 釋放劑 A 和 2-3 粒 鋼珠，研磨 1-2min 成漿體裝。 研磨完畢后加入 250 pl 快速 DNA 釋放劑 B ，混合均勻， 即可使用。

2.  按下表配制 PCR 反應(yīng)體系并混合均勻：   2×RAPA3G PCR Mix (with Dye)               25 pl

上游引物(10 pM)

下游引物(10 pM)

步驟 1 制備的模板 DNA                              2 pl

ddH2O

注意：當(dāng)擴(kuò)增片段>5kb 時(shí)，引物用量調(diào)整為 0.25-0.5pl。

3. PCR 擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)

請(qǐng)注意：(1) 該制品為熱啟動(dòng)制品預(yù)變性步驟 5min 不可縮 短，否則 DNA 聚合酶無(wú)法恢復(fù)活性。(2) 當(dāng)擴(kuò)增片段<1kb 時(shí)， 延伸時(shí)間使用 15s；擴(kuò)增片段 1-2kb 時(shí),延伸時(shí)間使用 45s ，擴(kuò)增片段 2-3kb 時(shí),延伸時(shí)間使用 1min ，當(dāng)擴(kuò)增片   段>3kb 時(shí)，請(qǐng)按照 2kb/min 的延伸時(shí)間進(jìn)行設(shè)置。(3)盡管 該酶具有 6kb/min 的延伸速度， 但按照 2kb/min 設(shè)置延伸時(shí) 間的條件下，能獲得最高的產(chǎn)量。

3.  注意事項(xiàng)： (1)  當(dāng)模板 GC 含量>70%時(shí)，請(qǐng)?zhí)砑?/span>

5× Q-Solution  (Cat. No.: A3002) 。(2)當(dāng)采用全血、血漿等 蛋白含量極高的樣本時(shí)， 擴(kuò)增完畢后可能會(huì)有變性的蛋白沉

淀，請(qǐng)離心后再進(jìn)行點(diǎn)樣和電泳。